中文摘要
乙型脑炎病毒囊膜糖蛋白E蛋白是该病毒的一种重要结构蛋白,可以诱导机体产生病毒中和抗体,是该病毒的重要免疫保护性抗原。运用短肽融合表达技术和血清学免疫反应对E蛋白进行抗原表位作图,发现了E蛋白中的一组新抗原表位。为了对该组新发现的抗原表位的结构与功能进行深入研究,继续采用短肽融合表达法对各表位进行核心序列的定位,运用系列突变表达方法对各表位的氨基酸序列组成进行研究。制备各表位单因子血清与单克隆抗体,采用体外细胞培养试验与动物体内试验以及多种免疫学方法对各抗原表位功能进行分析。本研究对乙型脑炎病毒重要免疫保护性抗原蛋白进行抗原表位结构与功能研究,可为进一步探索与了解乙型脑炎病毒的免疫保护机理,为以抗原表位为基础的新型基因工程疫苗和诊断试剂的研究提供重要的理论基础。
结题摘要
乙型脑炎病毒E蛋白是该病毒的一种重要表面结构蛋白,能诱导机体产生中和抗体与发挥免疫保护作用。本研究利用病毒高免血清以及单克隆抗体对先期鉴定出的位于E蛋白中的一组B细胞线性抗原表位进行了结构与功能研究。共计制备了针对其中8个线性抗原表位共计25株单克隆抗体,利用单克隆抗体分析了并精确定位了对应表位的核心结构序列。将JEV E蛋白抗原表位序列与其它黄病毒科病毒同源序列进行比对后,对各个表位进行了序列突变以及表达。利用单克隆抗体分析表明这些表位中有两个(E19、E33)是JEV病毒特异性表位,与其它黄病毒(WNV,DV,MVEV,UV)不存在交叉反应。其中表位E1单抗可与登革病毒1、3、4型同源序列发生交叉反应。E10表位单抗可与II型西尼罗病毒同源序列发生交叉反应。这些表位及单抗可用于黄病毒间的鉴别诊断。在这些抗原表位中,部分表位可以诱导中和抗体,但所有表位诱导的抗体以及单抗均不能100%中和JEV感染细胞。但将这些抗原表位组合设计合成一条新基因,表达蛋白免疫小鼠后对致死性病毒攻击能够提供80%免疫保护。如何利用这些抗原表位进一步为构建有效基因工程疫苗以及诊断试剂的工作有待进一步深入开展。
