中文摘要
天然橡胶是关系国计民生的战略物资和工业原料。我国天然橡胶严重短缺,而适合栽培橡胶树的面积有限,增产潜力不大。随着生物技术的发展,通过转基因技术进行橡胶树品种改良以提高其单位面积产量将是缓解我国天然橡胶严重短缺危机的主要出路。本项目将以橡胶树胚性悬浮细胞为受体材料,建立有效的根癌农杆菌介导的遗传转化体系,为橡胶树基因工程研究建立技术平台。在此基础上,将橡胶树乳管特异强启动子-橡胶延伸因子基因启动子与橡胶生物合成重要酶基因-焦磷酸酶基因重组成融合基因导入橡胶树并获得转基因植株。以期通过橡胶树焦磷酸酶基因在乳管中特异高效的表达,促进橡胶的生物合成,从而达到提高橡胶树胶乳产量的目的。本研究的成功,将为通过基因工程技术培育高产橡胶树新品种奠定良好的基础。
结题摘要
巴西橡胶树常规杂交育种周期较长,一般为20-30年,转基因育种技术可以大大缩短这一过程,将成为有效育种途径。本项目建立了橡胶树热研7-33-97品种胚性细胞悬浮培养系。用根癌农杆菌EHA105(携带pCAMBIA1301,含有gusA和hpt Ⅱ)侵染胚性悬浮细胞团,用GUS检测法分析了共培养时间和菌液浓度对转化效率的影响;测定了胚性细胞团对潮霉素和草胺膦(除草剂)的敏感性。结果表明, 适宜共培养时间为3 d,适宜菌液浓度为OD600=0.4-0.6。潮霉素致死剂量为15 mg/L,草胺磷致死浓度为1 mg/L。叶片提取DNA,PCR扩增获得了378 bp的REF启动子片段,该序列与NCBI报道的序列间同源性分别是98.68%和99.47%。胶乳提取RNA,RT-PCR获得了2310 bp的V-PPase基因片段,该序列与报道序列一致。用二者构建了橡胶树乳管特异高效表达载体,进行转化,获得了61个转基因的体细胞胚,经GUS检测和PCR检测证实为转基因体细胞胚。本研究为进一步获得乳管高效表达V-PPase基因的橡胶树转基因新品系奠定了基础。
