侧孢短芽孢杆菌（Brevibacillus laterosporus）胞外丝氨酸蛋白酶BLG4是第一个被报道的具有体壁降解和杀线虫活性的细菌侵染性蛋白酶，并已成功的实现了异源表达。进一步的研究证明了此类蛋白酶在具有杀线虫活性的土壤根际芽孢杆菌中是广泛存在。本项目拟通过易错PCR技术构建侵染性蛋白酶BLG4的随机突变文库，结合不同的筛选流程，筛选各种特性改变的突变子（如蛋白酶活性，线虫侵染活性，线虫体壁结合能力等），根据已有的丝氨酸蛋白酶的结构知识与突变信息，研究蛋白酶行使侵染作用的结构基础和分子机理。进而以获得的突变酶为材料，利用DAN-shuffling技术进一步提高蛋白酶BLG4的体壁降解活性和对线虫的毒力，构建高效表达高毒力侵染酶的线虫生防菌株，探索将侵染性蛋白酶用于实际线虫生防的关键技术。

侧孢短芽孢杆菌（Brevibacillus laterosporus）胞外丝氨酸蛋白酶BLG4 是第一个被报道的具有体壁降解和杀线虫活性的细菌侵染性蛋白酶。本项目以前期酶的纯化和功能分析,基因的克隆表达为基础,拟通过易错PCR 技术构建侵染性蛋白酶BLG4 的随机突变文库，结合不同的筛选流程，筛选蛋白酶活性和线虫侵染活性发生改变的突变子。进而以获得的突变酶基因为材料，利用DNA-shuffling技术对不同的突变基因优化重排，构建重排突变文库，以期筛选获得对线虫毒性更强的侵染蛋白酶。通过分析酶的突变位点与其线虫侵染活性的相关性,阐示蛋白酶行使侵染作用的结构基础和分子机理。探索通过蛋白质工程手段改善侵染性蛋白酶杀线虫毒力的关键技术，为解决目前微生物生防制剂在实际线虫防治中防效低下问题奠定基础。