粘膜免疫是机体抵御龋病的首要屏障，sIgA是粘膜免疫特异效应分子，其产生与DC对抗原的摄取、活化和B细胞的活化、增殖密切相关。因此，本课题针对DC和B细胞两种靶细胞，利用趋化因子CX3CL1/CCL21的协同免疫佐剂作用，增强防龋DNA疫苗粘膜免疫效果。首先，构建CX3CL1和CCL21真核表达质粒并检测基因表达及生物学功能。其次，通过鼻粘膜途径，以壳聚糖包裹CX3CL1/CCL21与防龋DNA疫苗共免疫，检测该免疫方式诱导特异性抗体的水平、免疫反应类型与强度，评价该免疫方式的防龋保护能力。最后，分析CX3CL1/CCL21对DC/B细胞基因表达的影响，检测该免疫方式对免疫局部和粘膜相关淋巴组织的细胞组成与微环境的影响，比较系统深入地探讨CX3CL1/CCL21增强防龋DNA粘膜免疫效果的可能机制。这样，为提高防龋DNA疫苗的粘膜免疫效果提供新的思路和方法，为免疫防龋理论提供新的实验依据。

本项目利用分子克隆技术、真核细胞表达技术分别构建趋化因子CX3CL1和CCL21的真核表达质粒并在培养细胞中检测基因表达和其生物学功能。以壳聚糖为粘膜递呈系统经鼻粘膜途径同时接种加强免疫，利用抗体检测技术、定菌鼠模型，检测该免疫方式诱导特异性抗体和抑制龋病的能力、诱导的免疫反应的强度，评价该免疫方式的防龋保护能力，并在此基础上研究了这两种趋化因子为分子免疫佐剂激发防龋DNA疫苗免疫反应的能力和类型，结合趋化因子表达质粒在体内外吸引免疫细胞的能力，探索其增强粘膜免疫效果的机制。本项目首次研制并证实了趋化因子CX3CL1和CCL21真核表达质粒可以加强防龋DNA疫苗的免疫效果，推动了防龋疫苗的研究；分析了趋化因子表达质粒体外对DC免疫活性增强作用及其在体内外可以吸引免疫细胞，诱导的免疫反应的类型，初步探索了其增强DNA疫苗免疫效果的机制，为防龋疫苗的研究提供了新的思路。同时，首次经体外对树突状细胞的免疫活性刺激实验证实不同分子量及脱乙酰度的壳聚糖免疫刺激活性存在显著差异，并筛选出最具免疫刺激活性的壳聚糖成功的制备了壳聚糖纳米颗粒粘膜免疫投递系统，为防龋DNA疫苗提供了安全高效的免疫方式。