中文摘要
Wnt 信号通路在发育和癌症等疾病中起重要作用。本研究主要基于我们以前的研究发现， CtBP阻遏Wnt靶基因的方式独立于TCF复合物和CtBP能够直接激活部分Wnt靶基因(Fang et al., 2006)。在本研究中，我们利用RNAi筛选方法发现Briker直接阻遏Wg靶基因nkd。我们在nkd调控序列中鉴定了一系列Brinker位点，并用EMSA分析方法证实Brinker与nkd调控序列中的位点有直接和特异地相互作用。据此构建的报告基因能够被Wg信号激活，但受到过表达Brinker的抑制。由于Brinker与CtBP有物理相互作用，我们认为Brinker介导了CtBP对Wnt靶基因的阻遏作用。另一方面，为了澄清CtBP阻遏和激活Wnt靶基因结构和功能的关系，我们构建了一系列CtBP突变体蛋白，分别缺失NAD(H)结合、二聚体形成和脱氢酶活性。在细胞实验中，我们发现这些活性对CtBP行使转录激活功能都是所必需的。总之，我们揭示了Brinker直接介导CtBP参与Wg靶基因的阻遏。我们还发现CtBP需要其结构完整性发挥细胞中激活Wnt靶基因的功能。
英文摘要
Wnt signaling plays essential role in animal development. Abnormal Wnt signaling may lead diseases including cancer and Alzheimer's disease. This study was proposed based on our previous finding that CtBP represses Wnt targets independent of TCF, the nuclear effecter. We have also shown CtBP directly activates a subset of Wnt targets (Fang et al., 2006). In this study, by RNAi screen, we have identified a novel repressor Brinker, whose roles are primarily defined in Dpp signaling, directly represses nkd, a Wg target in fly that we identified previously (Fang et al., 2006). We have shown in fly cells that Brk directly represses nkd in parallel with Gro. We found putative Brk sites located closely to a functional TCF cluster by EMSA assays. We have further shown that Brk represses a Wg-dependent activity this enhancer by reporter analysis. Since it is known that Brk physically interacts with CtBP, we conclude that Brk might mediate CtBP repressing Wg targets in Drosophila. On the other hand, to clarify the structure and function relationship of CtBP in modulating Wg target expression, we generate a series of mutant CtBP protein with point mutations predicted to disrupt CtBP's function, such as dimerization, NAD binding and dehydrogenase activities. We show in cultured cells that all the mutant CtBP protein
结题摘要
Wnt 信号通路在发育和癌症等疾病中起重要作用。本研究主要基于我们以前的研究发现， CtBP阻遏Wnt靶基因的方式独立于TCF复合物和CtBP能够直接激活部分Wnt靶基因(Fang et al., 2006)。在本研究中，我们利用RNAi筛选方法发现Briker直接阻遏Wg靶基因nkd。我们在nkd调控序列中鉴定了一系列Brinker位点，并用EMSA分析方法证实Brinker与nkd调控序列中的位点有直接和特异地相互作用。据此构建的报告基因能够被Wg信号激活，但受到过表达Brinker的抑制。由于Brinker与CtBP有物理相互作用，我们认为Brinker介导了CtBP对Wnt靶基因的阻遏作用。另一方面，为了澄清CtBP阻遏和激活Wnt靶基因结构和功能的关系，我们构建了一系列CtBP突变体蛋白，分别缺失NAD(H)结合、二聚体形成和脱氢酶活性。在细胞实验中，我们发现这些活性对CtBP行使转录激活功能都是所必需的。总之，我们揭示了Brinker直接介导CtBP参与Wg靶基因的阻遏。我们还发现CtBP需要其结构完整性发挥细胞中激活Wnt靶基因的功能。