中文摘要
功能血管系统网络的形成,是高等动物胚胎生长发育和成体他组织器官正常功能活动的基本保证,血管生长与功能的异常又是临床医学最为棘手的问题。因此,血管生成的机制,是生物发育学与临床医学的国际研究热点,各国争夺建立革新性疾病治疗技术的前沿阵地。近年来,血管生成机制的研究取得了许多新的突破,但同时也提出了更多重要的基础问题。血管内皮细胞的分化是其中突出的问题之一,尤其是血管内皮细胞早期分化机制,是从整体高度理解血管系统形成,利用干细胞进行血管修复与重建和实施组织工程等方面的重要基础。我们采用cDNA消减技术,从发育至三体节的早龄鸡胚中克隆有一些血管内皮(前体)细胞特异表达的基因,本项目采用核酸干扰的新技术手段,对其中三个基因进行功能分析,探讨他们对血管系统发育的作用,期望能发现在血管内皮细胞分化起作用的分子及其功能,增加我们对血管内皮细胞分化机制的了解。
结题摘要
本项目旨在建立早龄鸡胚活体的RNAi技术手段,并在此基础上通过对我们已筛选出的可能在血管内皮细胞分化中可能起作用的基因的功能分析,发掘血管内皮细胞分化的机制。 项目初步建立了以载体病毒自然感染为基础的对鸡细胞和活体鸡胚的RNA技术。此技术方法能克服现有通过媒介或电转染在鸡胚导入RNA构件方法的缺陷,是技术的创新。 项目完成了对鸡的Sizzled,Vezf1和Sepin三个基因在发育胚胎中表达的检测,阐明了这三个基因在发育鸡胚中的动态表达规律,为相关研究的积累了新资料。 项目在鸡胚上对这三个基因在血管系统发育中作用进行了大量的实验研究,结果表明对cSepin抑制导致鸡胚发育中止,因而不能观察到其在血管内皮细胞分化中的特别作用;通过对cSizzled和cVezf1在鸡胚上的抑制,我们已获得了它们在血管内皮细胞分化和血管系统发育中发挥作用的证据。虽然由于建立鸡血管内皮细胞增殖培养技术的多种尝试均未能获得成功(尽管我们首次建立了鸡血管内皮及其前体细胞的分离纯化技术)而未能通过细胞实验更深层次的揭示其机制,但我们的研究首次在鸡胚报告cSizzled和cVezf1的功能发现。
