中文摘要
人乳头瘤病毒(HPV)是性传播疾病的主要病原,其6、11等型可致尖锐湿疣、咽喉乳头瘤病等;而EB病毒(EBV)感染则传播广泛,并与鼻咽癌及淋巴瘤等恶性肿瘤发病密切相关。目前,尚无特异方法防治HPV和EBV所致的感染及其相关肿瘤。鉴于HPV结构蛋白L1作为疫苗载体具安全、免疫原性强等诸多优点,本研究拟对EBV潜伏膜蛋白2(LMP2)进行细胞毒T细胞(CTL)和B细胞表位预测和筛选,以HPV 6b型L1作为EBV-LMP2多表位载体,构建HPV L1/EBV-LMP2多表位重组真核质粒,并探讨其刺激机体产生的免疫效应;目的是使重组质粒表达的嵌合蛋白,既保持EBV表位的天然构象,又具备HPV L1蛋白的特性,可诱导机体产生同时针对HPV及EBV的免疫效应,最终达到采用一种嵌合疫苗同时防治HPV和EBV感染及其相关肿瘤的目的。本研究为嵌合疫苗的研制及开发提供理论和实验依据,具广阔的应用前景。
结题摘要
人乳头瘤病毒(HPV)和EB病毒(EBV)均为肿瘤原性病毒。鉴于HPV L1蛋白具安全有效的特点,本研究对EBV潜伏膜蛋白2(LMP2)进行了细胞毒T细胞(CTL)和B细胞表位预测、筛选和鉴定,选择优势T、B细胞表位组成EBV-LMP2多表位,以HPV 6bL1作为该多表位载体,通过分子克隆、间接免疫荧光、Westernblot、ELISA、细胞内细胞因子染色和CTL杀伤实验等方法,首先构建了EBV LMP2多表位的真核、原核表达质粒及HPV6b L1/EBV-LMP2多表位嵌合质粒,并进行了真核质粒表达的鉴定和原核蛋白的制备;通过免疫小鼠证实了该嵌合质粒具有较强的免疫原性,且可同时产生HPV6b L1和EBV-LMP2特异性的免疫效应;并进行了prime-boost免疫策略研究;此外,还对HPV 16 L2及其氨基端1-200短肽的广泛交叉反应特性,及EBV-LMP2 氨基段1-119短肽进行了研究。为以HPV L1和L2作为抗原表位释放系统的嵌合疫苗防治HPV和EBV相关肿瘤的研究提供了理论依据和实验基础。研究成果多次参加国内外学术会议交流,申报专利2项,培养硕士研究生18名。
