中文摘要
抗菌肽由于其生物学功能及其特性的的优势成为近年来医药、食品、畜牧等领域研究的前沿与热点课题。本项目对牛乳铁蛋白素(LfcinB)与其他活性较为理想的抗菌肽杂和,通过基因工程的方法表达、纯化制备,筛选活性更强的抗菌肽,探求抗菌肽LfcinB结构与功能的关系,以求获得抗菌活性更加理想、更加高效安全的抗菌肽衍生物。以筛选的高活性LfcinB衍生物为目标进行高效表达,分离纯化,进一步探寻基因工程制备高活性抗菌肽及其高效、低成本的分离纯化技术路线及方法。将基因工程制备的抗菌肽添加到肉仔鸡饲粮中,研究抗菌肽对肉仔鸡生长性能的影响及其作用机理,探讨抗菌肽作为饲料添加剂替代抗生素的可行性。为进一步明确抗菌肽的构效关系、筛选合成新型的功能专一、活性更强更理想的抗菌肽分子提供理论依据,为实现抗菌肽的产业化廉价生产及在畜牧中的应用寻求理论和技术路线。
结题摘要
抗菌肽由于自身的生物学功能及其特性优势成为近年来医药、食品、畜牧等领域研究的前沿与热点课题。本项目将牛乳铁蛋白素与其他四种活性较为理想的抗菌肽杂合,设计了四种全新的牛乳铁蛋白素杂合肽衍生物,通过基因工程方法实现了四种杂合肽的重组表达与制备,通过对抗菌肽抑菌活性与溶血活性测定,筛选到了活性较为理想的杂合肽牛乳铁蛋白素-天蚕素(LfcB-Ca),进一步阐明了抗菌肽的构效关系。以LfcB-Ca为目标进行高效表达,经过甲酸裂解,结合亲和层析、RP-HPLC技术,实现了LfcB-Ca的量化制备,平均每升细菌培养物获得15 mgLfcB-Ca,纯度达到80%以上。将重组LfcB-Ca以50、100、200 mg/kg添加到肉仔鸡日粮中,显著提高了肉仔鸡的平均日增重、耗料量,降低了料重比,提高了肉仔鸡的生产性能;减少肠道内大肠杆菌的数量,促进乳酸菌的繁殖,改善了肠道微生态环境;提高了肉仔鸡的免疫功能。项目为筛选高活性抗菌肽提供了新的方法,为实现其廉价的规模化生产提供了解决方案与技术路线,进一步阐明了抗菌肽在肉仔鸡饲料中应用的技术指标、作用及机理,对实现抗菌肽替代传统抗生素具有重要的理论和实践意义。
