本项目主要内容包括：（1）不同抗冻剂、玻璃化液属性研究，海水鱼类胚胎冷冻玻璃化液筛选及对胚胎成活率影响的研究；（2）高渗玻璃化液对卵、胚胎结构和形态损伤的研究；（3）不同冷冻方式对胚胎造成的冰晶损伤研究；（4）玻璃化冷冻过程中反玻璃化现象发生机制研究，探索解决反玻璃化的技术方法；（5）利用同工酶、RAPD等生物学技术对冷冻复活胚胎的遗传结构及能育性进行研究；（6）通过冷冻损伤机理的研究进一步优化海水鱼类胚胎玻璃化冷冻保存技术方法，提高海水鱼类胚胎复活率。通过海水鱼类胚胎冷冻损伤机理的研究，建立实用化的海水鱼类胚胎玻璃化冷冻保存技术体系，为重要养殖鱼类原种、良种及珍稀濒危鱼类种质资源的长期保存提供理论依据和技术方法。

鱼类胚胎超低温冷冻保存对于种质资源保存、细胞工程育种等具有重要意义。本课题利用牙鲆等海水鱼类胚胎为研究材料，通过抗冻剂对胚胎参透影响，研制了PM系列超低温冷冻保存液。通过胚胎对低温和溶液适应性研究，筛选出了适宜于冷冻保存胚胎时期。将显微注射技术与超低温保存相结合，筛选了保存液配方、注射剂量、浓度、注射部位等，研制了胚胎冷冻保存显微注射技术。经过玻璃化颗粒体积、胚胎数量等筛选，形成了胚胎玻璃化颗粒冷冻保存方法。对解冻水浴和蒸气温度、玻璃化形成率筛选，研制了蒸气解冻法。对植冰温度、降温速率筛选，优化了胚胎程序化冷冻保存技术。对保护液、胚胎时期、平衡方法、解冻方法筛选，优化了胚胎玻璃化冷冻保存技术。通过冷冻保存液、低温对胚胎形态、成活率和畸形率影响，探索冷冻损伤发生的机制。利用以上技术冷冻保存了牙鲆、大菱鲆胚胎，共获得复活胚胎42粒，孵化鱼苗34尾，胚胎复活率3%－21%，孵化率50%－100%；用显微注射技术获得68.2%-79.4%透明胚。本课题完成论文、专著和研究生论文共17篇（已发表11篇，SCI 2篇、专著1部、研究生论文3篇），培养研究生5名。参与获得国家技术发明二等奖1项。