中文摘要
鹅卵黄性腹膜炎,是发生于鹅生殖器官的大肠杆菌病,是高发于产蛋鹅的传染病,发病率和死亡率高,常造成非常大的经济损失,严重影响养鹅业的发展。本研究通过2-D电泳结合Western-blot等蛋白质组学技术,筛选差异蛋白质,提取回收差异蛋白质进行质谱分析确定蛋白序列及其基因序列,进一步设计引物扩增相关基因,通过原核表达系统表达差异蛋白并纯化后免疫小鼠以制备针对差异蛋白的单克隆抗体,并通过抗体中和试验筛选能够竞争性阻断细菌靶向黏附的抗体,用以该病的被动防治以及后期该细菌致病机理的研究。
结题摘要
本项目研究开展三年来,从两个方面进行了致鹅卵黄性腹膜炎大肠杆菌致病性探索。一方面,从基因组学角度,对实验室保存的菌株以及新分离菌株进行11种毒力基因分布检测,结果显示,不同菌株所携带的毒力基因种类存在差异。我们进一步对HPI毒力岛的irp1基因进行了分析研究,结果显示,irp1的1-543的个碱基编码的蛋白能使转化的工程菌显示细胞粘附性。另一方面,我们从蛋白组学角度,探寻致鹅卵黄性腹膜炎菌株的特异性蛋白。通过二维电泳和质谱分析,我们获得了20多个差异蛋白,选取11个蛋白进一步用半定量RT-PCR进行分析,结果显示30S RPS6和KAS1蛋白在致鹅卵黄性腹膜炎性大肠杆菌中特异性表达。通过原核表达,我们获得了这两种蛋白,亲和层析过柱纯化,将纯化的蛋白免疫Balb/c小鼠,制备了多抗血清和单克隆抗体(抗RPS6单抗3株,抗KAS1单抗4株)。本项目研究作为致鹅卵黄性腹膜炎大肠杆菌致病性研究起到了良好的开端作用,为后续研究准备了必要的材料,开创了重要的方向。
