死亡时间推断是法医工作的重点和难点，利用嗜尸性蝇类生活史、群落组成、演替等推断死亡时间、死亡地点及有无移尸等具有其优势。课题组前期对贵阳地区嗜尸性蝇类的种类、季节分布、群落演替、分子鉴定及不同时段蝇卵的基因表达差异进行了深入研究，并成功应用于实际案例，与美吉生物联合对大头金蝇蛹6个发育时段、棕尾别麻蝇蛹3个时段进行了真核转录组测序，获得较大数量的Unigenes和转录本，将差异表达基因进行GO功能注释和KEGGPathway富集分析，构建了高分辨率的基因表达数据，为嗜尸性蝇类转录组学研究奠定了基础。本研究拟在前期研究基础上，从分子水平对嗜尸性蝇类生理发育、基因表达、代谢调控进行研究，利用已构建的转录组数据库挖掘具有潜在应用价值的SNPs 位点和SSRs 位点，对与死亡时间相关的分子标记进行克隆表达，对其结构功能、生物学意义及法医学应用价值进行深入研究，以期为推断更精确的死亡时间提供科学依据

Postmortem Interval was the emphasis and difficulty in forensic cases. Inference death time, place of death and body movement by life history, community composition and succession of necrophagous flies had its own advantages compared to the traditional methods. Our research group had intensively studied the species, seasonal distribution, community succession, molecular identification and the gene expression in different periods of egg of necrophagous flies in Guiyang, and successfully applied them into forensic cases. We sequenced eukaryotic transcription groups of six developmental periods of bulk of Chrysomyia megacephala and three developmental periods of bulk of Sarcophga fuscicauda, respectively, acquired large samples of unigenes and transcription groups. The GO functional annotation and KEGG Pathway enrichment analysis of differential expressing genes has been done. Then the high resolution gene expression data was established. And this laid the foundation of the transcription group research of the necrophagous flies. This study will conduct the research of physiological development, gene expression and metabolic regulation of necrophagous flies from molecular level based on the former research foundation, use the transcription groups database to find out the SNPs and SSRs with potential application values, clone and express the death time relevant molecular markers, and intensively study their structure function, biological significance and forensic application, in order to provide scientific basis for more precisely postmortem Interval.

利用尸食性蝇类的研究推断死亡时间、死亡地点以及有无移尸等问题有其他方法无法比拟的优势。前期我们对贵阳地区不 同季节常见嗜尸性蝇类的种类、季节分布、群落演替等进行了观察统计，应 用 mtDNA对贵阳地区 常见嗜尸性蝇类进行了分子鉴定，电镜下观察不同发育时间蝇卵的形态学变化，对不同蝇卵在不同时间段的基因相对表达量进行了研究。与美吉生物联合对大头金蝇蛹6个发育时段、棕尾别麻蝇蛹3个时段进行了真核转录组测序，在该项目的资助下，对两个蝇种转录组测序数据进行了分析研究，获得了大头金蝇蛹6个发育时段43,408个unigenes和56,377个转录本，分析了转录物的功能注释，基因表达水平，GO和KEGG途径富集的特征。研究显示有904个下调差异基因和28774个上调差异基因在任意两个样本之间均有显著性差异，对这些序列数据的注释及生物信息学分析研究将为筛选大头金蝇蛹与死亡时间相关的分子标记提供实验依据。 获得了棕尾别麻蝇蛹3个时段真核转录组测序数据，共捕获38727 条Unigenes， 其差异表达基因数介于 1263耀2430，差异基因总数为5283。 SSR查找发现， 从8645 个 Unigenes 中共查找到12146 个 SSR 位点，占Unigene总数的22.3% 。研究显示，几丁质、保幼激素和黑色素等基因在昆虫发育和变态过程中扮演着关键角色，我们对转录组数据的分析研究发现两种蝇蛹的几丁质、保幼激素、黑色素、酪氨酸羟化酶与CBM-14基因等基因在不同发育时期表达量均有差异，并通过荧光定量实验验证了酪氨酸羟化酶与CBM-14基因在棕尾别麻蝇蛹的3个不同发育时间其表达量变化与转录组测序结果一致。课题组已经成功克隆出棕尾别麻蝇酪氨酸羟化酶基因，正在进行该蝇种酪氨酸羟化酶表达量与黑色素形成及其发育时间等功能研究。在前期研究的基础上，以贵阳地区常见嗜尸性蝇蛹为研究对象，以建立的转录组测序研究为前提，从分子水平对嗜尸性蝇类生理发育、基因表达、代谢调控进行研究，对与死亡时间相关的分子标记的结构功能、生物学意义及法医学应用价值进行深入研究，以期为推断更精确的死亡时间提供科学依据。