血管内皮生长因子-165（VEGF165）对肿瘤细胞及其血管的生长至关重要。以VEGF165为靶点开发靶向对比剂有望实现微小肿瘤的精准定位和定量诊断。我们前期实验发现VEGF165_适配体标记超顺磁性氧化铁（USPIO）能以肿瘤区VEGF165为靶点活体磁共振（MR）靶向成像。但其详细的强化曲线、对微小肿瘤靶向能力、体内代谢规律及其安全性等情况均不清楚。 . 本研究进一步采用荧光标记VEGF165_适配体后与超微超顺磁性氧化铁（USPIO）连接，并聚乙二醇包被，构建靶向MR阴性对比剂。通过体外实验后，活体内分析其稳定性，荧光成像观察其在体内分布与消除过程，并与MR成像结果对照，最后安全性评估；从分子、细胞、组织和器官水平分析其定位微小肿瘤的靶向性能，吸收、组织分布、分解、代谢、毒性及其与细胞间相互作用规律，探讨其机制，为新型MR对比剂设计奠定实验及理论基础。

VEGF165 is crucial for the development of tumor cells and vascular. To develop VEGF165 targeted as the contrast agent is likely to accurately localize and quantitatively diagnose small tumors. The previous experiments have discovered that VEGF165 aptamer labeling USPIO can target the tumor area of VEGF165 for MR imaging in vivo. However, the detailed strengthening curves, the targeted abilities, internal metabolic regularities and its safety to small tumors are all unclear.. The study takes fluorescence labeling VEGF165 aptamer further, and connects it with USPIO, embedded in PEG, so as to construct targeted MR negative contraster. After vitro experiments, we analyze the stability in vivo, observe the distribution and removal process in vivo by Fluorescence Imaging, compare with MR imaging results, and evaluate the security finally. We analyze the targeting performance, absorption, tissue distribution, decomposition, metabolism, toxicity, cell-cell interaction for small tumors from the levels of molecules, cells, tissues and organs, so as to examine its mechanism and establish experimental and theoretical basis for the new MR contrast agent.

研究背景与目的：MR靶向对比剂的理论基础研究是肿瘤精准诊治的重要前提。本研究拟采用CY5.5-VEGF165-aptamer标记超微超顺磁性氧化铁（USPIO），构建多模态靶向MR阴性对比剂，并同时观察其体内外对VEGF165靶点靶向结合、显像能力及其体内动态代谢过程。主要研究内容：1、⑴构建CY5.5-VEGF165-aptamer-USPIO新型MR对比剂，并理化性质表征及检测。⑵对构建的靶向对比剂进行ELISA实验，观察其体外对VEGF165结合活性。⑶对构建的靶向对比剂进行活体内小动物荧光成像实验，观察其体内分布与代谢规律，对肿瘤精准靶向性能。(4)对构建的靶向对比剂进行活体内小动物MRI成像实验，观察其MRI靶向成像性能，并与荧光成像实验对照。2、CY5.5-VEGF125-136小肽构建及体外靶向荧光实验部分：合成CY5.5-VEGF125-136小肽荧光对比剂，并体外对BEL-7402肝癌细胞靶向荧光实验。3、VEGF125-136-Gd合成及其体内外对肝癌细胞靶向实验部分：合成VEGF125-136-Gd靶向阳性对比剂并质谱及弛豫率检测，体内外对肝癌细胞VEGFR2靶点靶向MRI成像。重要结果与关键数据：1、⑴CY5.5-VEGF165_Aptamer-USPIO理化性质符合靶向对比剂要求。⑵CY5.5-VEGF165_Aptamer-USPIO体外可与VEGF165靶点靶向结合。⑶CY5.5-VEGF165_Aptamer-USPIO体内可以肿瘤VEGF165靶点靶向荧光及MRI成像，强化峰值时间在3小时，两者实验结果吻合。2、CY5.5-VEGF125-136体外可靶向肝癌细胞荧光成像。3、VEGF125-136-Gd体内外可对肝癌细胞VEGFR2靶点靶向MRI成像。该课题共发表期刊论文3篇，SCI论文2篇，1篇已经发表，1篇已经接收；申请国家发明专利一项，初审已合格。科学意义：CY5.5-VEGF165_Aptamer-USPIO活体内外可以肿瘤VEGF165靶点靶向成像，活体内荧光及MRI靶向强化峰值时间吻合，在3小时时间点，这一时间点为后续靶向磁热疗治疗肿瘤提供了充分依据，并为前期临床实验奠定了理论及实验基础。VEGF125-136可作为靶向对比剂导向小肽，靶向肿瘤细胞膜VEGFR2靶点，为肿瘤精准靶向诊治提供一种有价值新思路。