本项目以急性早幼粒细胞白血病（Acute promyelocyte leukemia，APL）为研究对象，从小分子药物诱导细胞凋亡及自噬的角度入手，以雷公藤甲素衍生物作为小分子干预手段，结合APL发病及耐药的生理病理微环境理论，拟证实雷公藤甲素可有效诱导AML细胞发生凋亡及自噬，评估雷公藤甲素作为APL治疗药物的可能性，为新型抗AML药物的研发奠定基础。

Acute promyelocyte leukemia (APL) is a kind of malignant clone disease in haemopoetic stem cells．Plenty of abnormal archaeoeytes and juvenile cells proliferate in marrow, and infiltrate generally in all kinds of organs and suppress the haematopoiesis．Triptolide, isolated from the herb Tripterygium wilfordii, as well as some of its derivants has been shown to potently induce apoptosis and autophagy in various malignant cells by inhibiting RNA synthesis and nuclear factor-κB activity. In this project, we aim to confirm whether APL cells can be induced to apoptosis and autophagy by triptolide effectively. Furthermore, we also focus on exploring the molecular mechanism of triptolide induced apoptosis and autophagy. The answers to these questions will lay a foundation for the development of new anti-APL drugs.

急性早幼粒细胞白血病（APL）是造血干细胞的恶性克隆性疾病，发病时骨髓中大量异常早期幼稚细胞增殖并抑制正常造血，并发弥漫性血管内凝血，早期死亡率很高。近年来研究发现雷公藤甲素具有显著的抗癌作用，本项目拟研究雷公藤甲素对APL细胞的杀伤作用及机制，为进一步深入研究及新药开发奠定基础。研究内容主要包括体外培养NB4细胞系及原代APL细胞系（与骨髓间质细胞共培养）。用不同浓度雷公藤甲素处理后，通过流式细胞术将体内分离APL细胞分选为CD33+CD45+高分化细胞及CD33+CD45-低分化细胞；用不同浓度雷公藤甲素处理APL细胞后测定其生长曲线及IC50；利用western blot、RT-qPCR、流式细胞术、间接免疫荧光等分子生物学手段检测APL细胞凋亡比率及自噬激活与否；并检测融合蛋白PML-RARα及依赖性特异泛素E3连接酶（RNF4）的表达变化。研究结果显示：雷公藤甲素能够显著抑制NB4细胞及原代APL细胞的生长增殖，IC50分别为72.00±2.30 nmpl/L和63.00±1.90 nmol/L；用10 nmol/L、50 nmol/L、100 nmol/L雷公藤甲素作用于NB4细胞24 h后，通过Annexin V-PI流式细胞术检测发现细胞凋亡率均成剂量依赖性上升；western blot检测结果也显示促凋亡蛋白如PARP、caspase-3、DR5及BAX的表达量均显著升高，而抑凋亡蛋白Bcl-2的表达量显著下降；同时我们还发现自噬相关蛋白LC3的表达量显著上升，而P62的表达量显著的降低；雷公藤甲素处理后PML-RARα蛋白表达量降低，而RNF4的mRNA表达水平显著的增加；不同浓度的雷公藤甲素处理原代及共培养APL细胞发现，CD33+CD45+高分化细胞的凋亡和自噬均呈显著的剂量依赖性升高。本研究表明雷公藤甲素可以在较低浓度下抑制NB4细胞及与骨髓基质细胞共培养的APL细胞的增殖并诱导其发生凋亡/自噬；雷公藤甲素可能通过调控泛素化修饰等相关通路达到抗白血病作用，这为临床应用雷公藤甲素治疗急性早幼粒细胞白血病白血病提供了实验依据。