Liddle综合征是一种以单基因致病性高血压为特征的常染色体显性遗传病，患者发病年龄小，易出现心肾功能不全和脑卒中等严重并发症。编码上皮钠通道β或γ亚单位的基因发生突变是其遗传基础。迄今，Liddle综合征致病突变的研究主要围绕β亚单位展开，但对γ亚单位突变的致病机制仍知之甚少。本项目拟在青年发病的高血压患者中筛选临床疑似Liddle综合征患者，筛查γ亚单位基因新突变（c.1711G>T是在前期筛查出的新突变）。通过建立中国仓鼠卵巢细胞基因异源性表达系统，采用定点突变、质粒转染、膜片钳等技术，结合基因型表型关联分析及临床干预效果，明确新突变的致病性，探讨新突变导致Liddle综合征的分子机制。深入研究γ亚单位基因新突变致病的分子机制，可以为Liddle综合征基因诊断和临床干预提供新的靶点，有助于患者确诊、家系成员筛查和靶向治疗，开辟防治高血压的新思路，具有重要的理论意义和临床实用价值。

Liddle syndrome, an autosomal dominant form of monogenic hypertension, is characterized by early penetrance of hypertension, and early onset of severe complications such as cardiac or renal dysfunction and stroke. Mutations in the genes encoding βor γ subunit of the epithelial sodium channel (SCNN1B or SCNN1G) constitute the genetic basis of Liddle syndrome. To date, research on the pathogenic mutations of this disorder has focused on β subunit, while little is known about the molecular pathogenesis of mutations in γ subunit. The project plans to screen for Liddle syndrome suspects to identify novel mutations in SCNN1G (e.g., c.1711G>T was a novel mutation in SCNN1G identified in the previous work). To confirm the pathogenicity of novel mutations identified and explore the molecular mechanism whereby these mutations cause Liddle syndrome, heterologous gene expression system of Chinese hamster ovary cell will be created, and site-directed mutagenesis, transfection with plasmid and patch clamp technique will be used in combination with assessment of treatment. Research into molecular pathogenesis of novel mutations in SCNN1G can not only provide new targets of genetic diagnosis and pharmacological treatment, contributing to confirmed diagnosis of patients, family screening and targeted therapy, but provide a new resolution of hypertension prevention and treatment as well, with great theoretical significance and clinical value.

Liddle综合征是一种以单基因致病性高血压为特征的常染色体显性遗传病，患者发病年龄小，易出现心肾功能不全和脑卒中等严重并发症。编码上皮钠通道β和γ亚单位的基因，SCNN1B和SCNN1G，发生突变是其遗传基础。迄今，Liddle综合征致病突变的研究主要围绕β亚单位展开，但对γ亚单位突变的致病机制仍知之甚少。在Liddle综合征的前期筛查中，本项目组发现一个以早发和顽固性高血压为特征的家系，其中两名家系成员有脑卒中史，先证者父亲32岁死于脑卒中。先后对先证者及其他家系成员进行基因检测，在SCNN1G发现一个突变,p.E571*。经证实，SCNN1G基因p.E571*突变是尚未报道的新突变。为了明确该突变的致病性，本项目进行了细胞功能学研究。采用定点突变技术，构建野生型和p.E571*突变型质粒，转染中国仓鼠卵母细胞实现异源表达，进一步应用膜片钳检测新突变对上皮钠通道活性的影响。结果显示，表达p.E571*突变型钠通道卵母细胞的钠电流强度是表达野生型钠通道卵母细胞的3倍，说明新突变会引起上皮钠通道活性增强。当使用阿米洛利培养液同时处理表达野生型和突变型钠通道的卵母细胞，表达野生型钠通道卵母细胞的钠电流强度不受影响，而表达突变型钠通道卵母细胞的钠电流强度却显著降低，表明阿米洛利可以抑制由新突变导致的增强的上皮钠通道活性。对该家系中5名有症状的突变携带者进行阿米洛利干预治疗，1个月随访发现，其血压和血钾均恢复至正常水平，进一步验证了新突变的致病性。细胞功能学和临床干预两方面证据证明p.E571*突变具有致病性，其通过增强上皮钠通道活性引起Liddle综合征，上皮钠通道抑制剂阿米洛利可以进行靶向干预治疗。此外，在对Liddle综合征患者的筛查中，对16名疑诊患者进行了基因检测，确诊2名携带SCNN1B基因已知致病突变的患者，家系筛查确诊5名Liddle综合征患者。本项目明确了SCNN1G基因新突变p.E571*的致病性，并揭示了其导致Liddle综合征的分子机制，为Liddle综合征基因诊断和临床干预提供新的靶点，有助于患者确诊、家系成员筛查和靶向治疗，具有重要的理论意义和临床实用价值。