前期研究表明应用温阳平喘胶囊可通过调控Notch通路减轻哮喘模型的血管再生/重塑，从而改善气道重塑，表明哮喘中存在Notch通路的激活，本研究将以此为基础，复制慢性哮喘大鼠模型，研究Notch通路对哮喘模型免疫耐受的调节，观察Notch通路调控哮喘树突状细胞的活性，并首次将siRNA及质粒转染技术引入哮喘Notch通路中，通过对哮喘模型Notch1进行沉默和过度表达，分别检测哮喘动物骨髓源成熟树突状细胞的活性变化，揭示Notch通路对哮喘树突状细胞的调控机制，探讨Notch通路在哮喘发病中的作用，阐明温阳平喘胶囊调节Notch通路及树突状细胞的机制及治疗哮喘的机制。

Previous study showed that asthma model vascular regeneration / remodeling could be alleviated by Wenyang Pingchuan capsules through Notch signaling pathway, then improving airway remodeling, so that we proved Notch signaling pathway was activated in asthma. This study will base on above results, then we will copy chronic asthma rats model, continue to do study on Notch pathway regulation to immune tolerance in the the asthma animal model. We will observe Notch pathway regulating dendritic cells activity in asthma, and introduce siRNA and plasmid transfection technology into Notch signal pathway in asthma for the first time, then we will separately detecte the asthma animal bone marrow source activity of mature dendritic cells by silencing and overexpression Notch1. At last, we will reveal the mechanisms on Notch signaling pathway regulating dendritic cell activity in asthma, explore the role of the Notch pathway in the pathogenesis of asthma, and clarify Wenyang Pingchuan capsules regulation mechanism to Notch pathway and dendritic cells, and mechanisms of treating asthma.

目的：通过观察平喘颗粒对慢性哮喘大鼠模型Notch通路及DC影响，分别以siRNA及质粒过表达干预Notch1，观察DC的活性及Notch通路相关因子变化，阐述Notch通路对哮喘树突状细胞，哮喘以及免疫耐受的调控机制。方法：1、将Wistar大鼠随机分正常对照组；模型组；地塞米松组；中药组。光镜下观察哮喘大鼠的慢性炎症及气道重塑改变，测定 BALF细胞计数；检测肺组织中 Notch 通路中各因子表达。2、Wistar大鼠随机分正常对照组；模型组；中药组，分离及培养骨髓源性成熟 DC，后鉴定，检测其活性。3、利用 siRNA 技术，将干扰后DC 分为正常对照组；空载体组；转染重组质粒组；转染重组质粒（加中药血清）组。观察 DC 活性表达的变化，流式细胞分析 DC 表面分子 CD系列因子及MHCⅡ的表达，检测 DC 中 Notch1，Hes-l、PS1 及RORγt，Foxp3表达。4、通过对Notch1 过表达质粒 pCS2 Notch1 ICv-6MT，进行质粒扩增并转染第二部分培养出的成熟 DC，分为四组：正常对照组； pCS2； LPS+pCS2 Notch1 ICv-6MT 组； LPS+pCS2 Notch1 ICv-6MT+中药血清组。观察DC 活性表达的变化，流式细胞分析 CD系列因子及MHCⅡ分子的表达情况、检测 Notch1、Hes-l、Gsk-3β、PS1，T-bet及GATA-3表达。结果及结论：1. 平喘颗粒能降低慢性哮喘大鼠模型中Notch1、2、4，Jagged1、2及Hes-l、Gsk-3β、PS1表达，促进Notch3、DLL1、3表达。2.平喘颗粒能降低哮喘大鼠DCs中 Notch1、Jagged1及GATA-3的表达，提高DCs CD205、T-bet及DLL1表达。3.平喘颗粒可减低受siRNA干扰后DCs中 Notch1、PS1、Hes-1及RORγt表达，提高DCs CD80、CD86、MHCII、CD205、FOXP3表达。4.、平喘颗粒能降低Notch1过表达后DCs CD11c、CD80、CD86、MHCII、Notch1、Hes-l、PS1 mRNA及GATA-3表达，提高DCs CD205 mRNA、Gsk-3β分子以及T-bet表达。