中文摘要
肾间质纤维化是各种肾脏疾病发展至终末期肾病的共同病理基础。近来国内外研究对肾小管上皮细胞间充质转分化（EMT）与肾间质纤维化的关系提出质疑。进一步探寻肾间质纤维化形成的机制及其有效干预措施已成为当前亟待解决的问题。本研究以肾间质纤维化发生的初始环节为切入点，围绕“凝血酶可通过激活PAR-1/NF-κB细胞信号转导通路介导肾间质纤维化早期炎症细胞浸润和致纤维化因子的释放”这一假说，结合中药提取物水蛭素能特异性结合凝血酶的特点，通过在体实验研究，利用病理学、分子生物学技术，对水蛭素干预后肾间质纤维化早期细胞信号转导通路相关的PAR-1, NF-κB等指标，肾间质促纤维化因子TGF-β1和炎症因子ICAM-1，MCP-1，及细胞表面标志物a-SMA，E-Cadherin的表达进行观察，探讨水蛭素对于肾间质纤维化早期细胞信号转导的干预效应，为研发抗肾间质纤维化新药提供新的干预靶点和实验根据。
英文摘要
Renal Interstitial Fibrosis(RIF)is final way of end stage renal disease. In the past, EMT was thought to be crucial in RIF. However, the existence of EMT has been questioned by lately research. To further explore the pathogenesis and intervention of RIF is a problem that needs to be solved. The research focuses on the the initial stage of RIF as a new intervention point. On the hypothesis of “thrombin activates PAR-1/NF-κB cellular signal transduction and mediates early interstitial inflammation and release of pro-fibrosis factors”, combining the fact that hirudin can specifically bind thrombin, the research explores the intervention mechanism of hirudin in early cellular signal transduction in vivo by observing and testing the expression of initial cellular signal transduction related indicators such as PAR-1 and NF-κB, pro-fibrosis factor TGF-β1, inflammation factors ICAM-1 and MCP-1, and cell surface makers a-SMA and E-Cadherin in a pathologic and molecular level, and thus provides a new intervention target spot and experiment basis for the research and development of anti-fobrosis medicine.
结题摘要
肾间质纤维化是各种肾脏疾病发展至终末期肾病的共同病理基础。近来国内外研究对肾小管上皮细胞间充质转分化（EMT）与肾间质纤维化的关系提出质疑。进一步探寻肾间质纤维化形成的机制及其有效干预措施已成为当前亟待解决的问题。本研究以肾间质纤维化发生的初始环节为切入点，围绕“凝血酶可通过激活PAR-1/NF-κB细胞信号转导通路介导肾间质纤维化早期炎症细胞浸润和致纤维化因子的释放”这一假说，结合中药提取物水蛭素能特异性结合凝血酶的特点，通过在体实验研究,建立单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠模型，利用病理学、分子生物学技术，对水蛭素干预后肾间质纤维化早期细胞信号转导通路相关的PAR-1, NF-κB等指标，肾间质促纤维化因子TGF-β1和炎症因子ICAM-1，MCP-1，及细胞表面标志物a-SMA，E-Cadherin的表达进行观察，探讨水蛭素对于肾间质纤维化早期细胞信号转导的干预效应。结果显示，水蛭素可在一定程度上改善UUO大鼠血清Scr、BUN水平，减轻梗阻侧肾间质炎症浸润、纤维组织增生等病理损伤程度；在分子层面，通过PCR及Western Blot技术检测，发现水蛭素能够明显下调UUO大鼠梗阻侧肾组织中PAR-1及NF-κB基因及蛋白表达水平，且其纤维化早期炎症细胞因子ICAM-1，MCP-1、促纤维化因子TGF-β1、细胞表面标志物α-SMA亦有明显下调。本研究还观察了水蛭素对肾间质P38/MAPK及其蛋白磷酸化水平的影响，发现水蛭素可明显下调UUO大鼠肾间质P38蛋白磷酸化水平，但对正常P38基因及蛋白表达没有明显调节作用。以上结果提示了水蛭素对UUO大鼠具有延缓其肾间质纤维化进展的作用，其机制可能与水蛭素干预了UUO大鼠肾间质纤维化早期细胞信号转导通路相关的PAR-1、 NF-κB等指标表达，进而下调了其下游促炎症指标ICAM-1、MCP-1、促纤维化指标TGF-β1、EMT标志物α-SMA的表达有关，而磷酸化p-P38蛋白可能作为其上下游信号通路的连接点，参与了水蛭素的抗肾间质纤维化进程。因此，该研究为研发抗肾间质纤维化新药提供新的干预靶点和实验根据。