RET基因突变是遗传型甲状腺髓样癌 （MTC） 的最主要发病原因，在发生点突变、丢失或重排后，可不同程度激活下游PI3K和ERK等信号通路，导致肿瘤发生。目前单点突变已经实现个体化精准治疗，但多点复合突变后临床表现复杂，发病机制不清，尚无治疗指南。课题组首次在国内21个MTC家系发现4个顺式复合突变（C634Y/D707E、C634W/L760Q、C618R/G691S、R982H/G691S），其临床表型变化多样。为进一步探讨其致病机制，拟在体外细胞水平研究顺式复合突变对下游信号通路的影响和体内裸鼠成瘤能力的观察，同时在不断增加的临床家系中动态验证。该研究以RET基因顺式复合突变体的临床发现为起点，探讨其致病机理，该研究可望为MTC患者的个体化治疗提供有效指导。

Virtually all patients with hereditary medullary thyroid carcinoma habour RET germline mutations and approximately 50% of sporadic MTCs habour somatic RET mutations. Single or multiple mutations, duplications, insertions or deletions, and chromosomal rearrangements involving RET lead to the activation of ERK and PI3K signaling pathways and thus give rise to oncogenesis. Precision medicine have been widely studied in single mutations. However, the complex mechanism of multiple mutations of RET retards the progress of personalised medicine in medullary thyroid carcinoma. Our study group have collected 21 families of hereditary MTC, 4 of which are double mutations in cis（C634Y/D707E、C634W/L760Q、C618R/G691S、R982H/G691S） and present with varying clinical manifestations. The influence of multiple mutations on downstream signalling pathways in vitro and the oncogenic activity of nude mouse in vivo are studied to analyze the mechanism of MTC pathogenesis. The study aims to clarify the mechanisms of RET double mutations and to provide the guidance on personalised therapy of hereditary MTC by utilizing the method of cell biology and molecular biology based on clinical charateristics.

背景：RET基因突变是遗传性甲状腺髓样癌的主要发病机制，在发生点突变、丢失或重排后，可不同程度激活下游PI3K和ERK等信号通路，导致肿瘤发生。目前单点突变已经实现个体化精准治疗，但多点复合突变后临床表现复杂，发病机制不清，尚无治疗指南。课题组首次在国内发现4个顺式复合突变（C634Y/D707E、C634W/L760Q、C618R/G691S、R982H/G691S），其临床表型变化多样。为进一步探讨其致病机制，拟在体外细胞水平研究顺式复合突变对下游信号通路的影响，同时在不断增加的临床家系中动态验证。该研究以RET基因顺式复合突变体的临床发现为起点，综合运用分子生物学等手段，阐明其致病机理。该研究可望为MTC患者的个体化治疗提供有效指导手段。内容：①课题组成功构建4组RET顺式复合突变NIH 3T3细胞系（C634Y/D707E；C634W/L760Q；C618R/G691S；R982H/G691S），验证为稳定表达；②采用荧光素酶实验，检测C618R/G691S复合突变对下游信号转导的影响， 检测突变体对IRE和SRE元件的下游基因表达激活能力；③利用二代基因检测技术对对肿瘤标本进行RET全外显子检测，同时在不断增加的家系成员中进行动态监测。重要结果：①研究期间共新增遗传性甲状腺髓样癌家系10余组，对其符合手术指征的患者行手术治疗，对约40例遗传性甲状腺髓样癌患者及其家属进行基因检测，突变常发生于RET C634R，C634Y，C634W等。发现4 例未报道突变。 ②综合运用细胞生物学和分子生物学手段进行体外细胞实验，探索复合突变对疾病发生、发展影响。研究显示C618R和G691S突变体较野生型能够更强烈地激活下游基因表达，部分阐释RET基因突变对甲状腺髓样癌发病的机理。意义：通过临床与分子生物学相结合，较为全面地认识遗传性甲状腺髓样癌在发病机制、临床治疗等方面的相关内容，逐步制定甲状腺髓样癌个体化诊疗方案，同时为探讨分析RET突变体的功能奠定基础。掌握RET复合突变的科学有效的研究方法，将对今后更加科学全面揭示肿瘤的发病机制具有指导作用。