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基于PCR技术及G-qudruplex比色探针的藏成药中藏红花可视化基因检测体系的建立及应用

基于PCR技术及G-qudruplex比色探针的藏成药中藏红花可视化基因检测体系的建立及应用
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  • 批准号:81403185
  • 批准年度: 2014年
  • 学科分类:民族药学(H2818) |
  • 项目负责人:陈蓉
  • 负责人职称:助教
  • 依托单位:成都中医药大学
  • 资助金额:23万元
  • 项目类别:青年科学基金项目
  • 研究期限:2015年01月01日 至 2017年12月31日
  • 中文关键词: PCR;G-qudruplex;藏红花;可视化;建立
  • 英文关键词:Tibetan patent medicine;Crocus sativus;G-qudruplex;colorimetric detection;DNA identification

项目摘要

中文摘要

藏红花(Crocus sativus L.)是一种在复方成药制剂中应用广泛的贵重民族药材,指标成分为藏红花素类(Crocin),但是该类成分还存在于栀子等药材,采用HPLC等化学分析方法难以确认复方成药制剂中藏红花投料的真实性。在前期的研究中,申请人发现采用可视化基因检测方法可以实现对包括片剂、丸剂、口服液、注射液等剂型在内的复方成药制剂的真伪进行鉴别。在此基础上,针对复方藏成药制剂中藏红花检测困难的情况,在藏红花的鉴定中引入可视化基因检测方法,以含有藏红花的多种藏成药(如八味西红花止血散、红花如意丸)为研究对象,利用聚合酶链式反应(PCR)对差异性大、拷贝数高的ITS序列进行特异性扩增,并将PCR扩增与新型的G-qudruplex(G-四聚体)比色探针相结合,构建出一个准确、快捷、成本合理的藏成药中藏红花的可视化基因检测体系,为成分复杂、药材经加工的藏成药中贵重药材的鉴定探索一条新的道路。

英文摘要

Crocus sativus is one of the widely used valuable regional medicinal materials in compound preparations. It can really be misleaded only to detect the Crocin in processed medicine by HPLC as Crocin is also found in Gardenia jasminoides Ellisthis and other medicinal plants. Our previous study shows that we can apply a DNA based colorimetric detection method to the identification of CPM in the form of tablets, pills, oral liquids and also injections. On the basis of this study, a colorimetric gene test is introduced for the difficulties of the authentication of Crocus sativus in complex preparations. Selecting several kinds of Crocus sativus contained TPM(Tibetan patent medicine)(Ba wei xi hong hua zhi xue san and Hong hua ru yi wan)as the research object, the species specific and highly repetitive ITS sequence will be amplified by PCR (Polymerase Chain reaction). Furthermore, the combination of PCR and G-qudruplex colorimetric probes will finally make it an accurate、fast and cost-effective detection system of Crocus sativus in TPM and it can also provides a new way to detect other precious medicinal materials in complex and processed Tibetan patent medicine.

结题摘要

藏红花(Crocus sativus L.)是一种在复方成药制剂中应用广泛的贵重民族药材,指标成分为藏红花素类(Crocin),但是该类成分还存在于栀子等药材,采用HPLC等化学分析方法难以确认复方成药制剂中藏红花投料的真实性。本项目利用分子生物学方法建立了①藏红花药材及藏成药中藏红花的可视化基因检测方法,该方法准确、快捷、成本合理,仅从颜色变化就可以判断样品中是否使用藏红花②药材、藏(中)成药中原药材的定量基因检测方法,可以实现对药材粉末或者成药中原药材的定量测定,具有较高的准确性和重复性。本研究提供了一个可以同时对生物样本进行定性和定量检测的方法,可以进一步推广应用于其他领域。

评估说明

    国家自然科学基金项目“基于PCR技术及G-qudruplex比色探针的藏成药中藏红花可视化基因检测体系的建立及应用”发布于爱科学iikx,并永久归类于相关科学基金导航中,仅供广大科研工作者查询、学习、选题参考。国科金是根据国家发展科学技术的方针、政策和规划,以及科学技术发展方向,面向全国资助基础研究和应用研究,发挥着促进我国基础研究源头创新的作用。国科金的真正价值在于它能否为科学进步和社会发展带来积极的影响。

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