MiRNA表达谱的改变可致正常成纤维细胞（NF）和肿瘤相关成纤维细胞（CAF）之间表型发生相互转变，从而进一步影响癌细胞的生物学行为；复方苦参液的抗癌作用机制可能与其抑制CAF细胞生物学功能有关。本项目拟寻找大肠癌（CRC）组织的成纤维细胞中，对其表型转化起关键作用的特异性miRNA，并验证复方苦参液治疗大肠癌的具体作用机制。本研究首先观察复方苦参液对肠癌CAF细胞活化的抑制作用，通过对比NF细胞及CAF细胞miRNA表达谱及功能学验证，找出其中影响肠癌CAF表型的关键miRNA分子；进一步通过抑制或过表达相应miRNA分子以观察复方苦参液是否通过关键miRNA分子抑制肠癌CAF细胞；最后通过对比NF细胞和CAF细胞中mRNA表达谱及荧光素酶报告基因实验探讨候选miRNA的作用途径及复方苦参液的作用机制。本研究的完成能为肠癌治疗提供新靶点，并阐明复方苦参液治疗肠癌的具体机制。

The alteration of miRNA expression profiling in fibroblasts could induce the phenotype conversion between normal fibroblasts (NFs) and cancer-associated fibroblasts (CAFs), thereby further influence the biobehavior of cancer cells. The mechanism of cancer inhibition by Combined Kushen Injection maybe due to the inhibition of CAFs biobehavior. This study will find the specific miRNAs which may play critical roles in the conversion between NFs and CAFs in colorectal cancer (CRC) tissues, and will explain the mechanism of Combined Kushen Injection in the treatment of colorectal cancer. In this study, we will observe the effect of the inhibition of Combined Kushen Injection to CRC CAFs firstly. Then we will discover the critical miRNAs which influence the phenotype of CRC CAFs by comparing the miRNA expression profiles between NFs and CAFs and functional validation. Furthermore, we will either over-express or inhibit the candidate miRNAs in CAFs to observe whether the inhibition of Combined Kushen Injection to CAFs is mediated by the critical miRNAs. Finally, through comparing the mRNA expression profiles of NFs and CAFs and luciferase reporter assays, we will discuss possible mechanisms of the candidate miRNAs, and also the mechanisms of inhibition roles of Combined Kushen Injection to CAFs. The completion of this work will provide novel therapeutic target of colorectal cancer and explain the mechanism of Combined Kushen Injection in the treatment of colorectal cancer.

肿瘤组织中成纤维细胞呈活化状态，为肿瘤相关成纤维细胞（CAF），miRNA表达谱的改变可致正常成纤维细胞（NF）和CAF细胞之间表型发生相互转变。CAF细胞与肿瘤细胞之间的“相互对话”是促进肿瘤发展的重要因素，并且由于其遗传稳定而不会出现抗原丢失和耐药现象，所以CAF细胞是抗肿瘤治疗的一个较好的靶点。 本研究通过肿瘤细胞条件培养基将NF诱导成CAF细胞，并通过miRNA表达谱及qRT-PCR方法找出与成纤维细胞表型转化起关键作用的miRNA分子；通过transwell观察复方苦参液对CAF促肿瘤细胞迁移功能的影响；通过qRT-PCR检测复方苦参液对关键miRNA分子表达的影响；将关键miRNA分子在肠成纤维细胞CCD-18Co中过表达，收集条件培养基处理DLD-1、HCT-8细胞，通过cck8和transwell实验观察其对DLD-1、HCT-8细胞增殖迁移能力的影响；将miR-1246用Cy3标记，转染到成纤维细胞CCD-18Co，并与DLD-1细胞间接共培养，同时设立外泌体抑制剂GW4869对照组，通过激光共聚焦显微镜观察其从成纤维细胞传递给肿瘤细胞的途径；在HCT-8细胞中高表达miR-1246，通过免疫荧光观察细胞中的ß-catenin表达情况。 研究结果显示，与NF相比，miR-1290、miR-1246在肠癌CAF细胞中高表达；miR-1290、miR-1246可使NF发生表型转化（活化标志物αSMA、FAP表达增高）；复方苦参液可以通过抑制miR-1290、miR-1246表达抑制CAF细胞的促肿瘤迁移功能；高表达miR-1290的CCD-18Co细胞能促进HCT-8细胞的迁移能力；高表达miR-1246的CCD-18Co细胞对DLD-1、HCT-8细胞的增殖能力有轻微促进作用，并能显著促进DLD-1、HCT-8细胞的迁移能力；高表达miR-1246的CCD-18Co细胞可以通过外泌体途径将miR-1246传递给肠癌细胞，并激活ß-catenin，从而促进肠癌细胞的增殖迁移能力。该研究结果为将来治疗肠癌提供潜在的分子靶点；此外，该结果提示复方苦参液的抗肿瘤途径除了文献报道的较高剂量可以直接抑制肿瘤细胞外，较低剂量即可抑制微环境中含量较多的CAF细胞而抑制肿瘤的进展，该研究对复方苦参液的临床进一步推广应用及深入研发有一定的应用价值。