虽然雌激素受体作用通路是国内外学者研究抗骨质疏松作用机制的主要研究方向，而申请者与合作者课题组基于中医理论，通过对女贞子作用于动物模型中肠、肾、骨三个器官系统的综合研究，首次发现并提出了女贞子抗骨质疏松的另一作用途径，即通过调控肾脏维生素D3代谢酶，增加体内活性维生素D（1,25(OH)2D3）水平，改善体内钙代谢平衡，从而促进骨矿化，抑制骨矿流失；并筛选出活性化合物A和B。双方希望通过开展生物学与化学的合作研究，以前期研究为基础，首先系统探讨活性化合物A和B对维生素D3代谢合成酶1α-羟化酶以及分解酶24-羟化酶的不同作用以及分子机理。在此基础上，尝试将包含化合物A和B在内的女贞子三萜类物质进行富集，以及对女贞子进行系统分离得到不同酒精梯度组分，在已建立的体外和体内平台上进行效果验证，以期将女贞子抗骨质疏松的作用物质基础进一步扩充。

Osteoprotective actions of traditional Chinese Medicine (TCM) are primarily attributed to their estrogen like and direct effects on bone metabolism. Preliminary researches in collaboration with partners of the application firstly discovered another pathway for the herb of Frcutus Ligustri Lucidi (FLL) to combat osteoporosis, i.e., by modulating renal vitamin D metabolism, after systematic studies in intestine, kidney and bone of the animal model, on the basis of TCM theory. FLL could increase production of active vitamin D3 (1,25(OH)2D3), thereby benefit calcium (Ca) balance, enhance bone mineralization and inhibit bone loss. Furthermore, compound A and B were identified to be the active components. On the basis of preliminary researches, the applicant and her partner want to continue collaborative researches, to study FLL regulation on vitamin D3 metabolism. Firstly, differential actions and molecular mechanisms of compound A and B on vitamin D3 synthetic enzyme of 1 alpha hydroxylase and catabolic enzyme of 24 hydroxylase, will be investigated in a systematic way. On such basis, triterpenes including compound A and B in FLL will be isolated; FLL will also be subjected to systematic isolation by different concentration of ethanol in order to make four ethanol fractions. Finally, the triterpene fraction together with FLL four ethanol fractions will be verified their potential actions on vitamin D metabolism and Ca balance on the established in vitro and in vivo platform, in order to indentify more active components or fractions.

申请者与合作者课题组基于中医理论，首次发现并提出了女贞子抗骨质疏松的另一作用途径，及通过调控肾脏维生素D3代谢酶，增加体内活性维生素D水平，改善体内钙代谢平衡，从而促进骨矿化，抑制骨矿流失。本项目在前期工作基础上，进一步确认了女贞子醇提物（FLL）对维生素D3代谢酶的调节作用，并确立了活性成分细胞筛选平台。经过女贞子化学成分的系统分离和活性筛选，最终发现活性成分即为女贞子的标志成分，齐墩果酸（OA）和熊果酸(UA)。在老年骨质疏松模型中，FLL,OA以及OA与UA混合物表现出较好的骨保护，调节钙平衡的作用。虽其对血清活性维生素D3水平作用不明显，但FLL,OA以及OA+UA对肾脏维生素D3代谢酶蛋白表达的调节作用表明，维生素D3代谢酶是其作用重要靶点。在更年期骨质疏松模型，单体OA表现出较强的骨保护作用，同时较高剂量的OA可使得血清1,25(OH)2D3水平明显上升，且肾脏维生素D3合成酶基因表达水平变化明显，进一步表明单体OA可通过调节维生素D3代谢酶，从而调节血清1,25(OH)2D3水平。本课题首次发现，女贞子醇提物及其活性成分齐墩果酸和熊果酸体内作用新靶点--维生素D3代谢酶，其通过调节维生素D3代谢酶，增加体内活性维生素D3水平，从而改善骨质疏松动物模型体内钙平衡以及发挥骨保护作用。除了体内激素，自然界中尚未发现有直接通过调节维生素D3代谢酶，尤其是CYP27B1合成酶，从而影响1,25(OH)2D3合成的物质。齐墩果酸和熊果酸作用于维生素D3代谢酶的靶点从未被人发现。另外，本课题发现了齐墩果酸和熊果酸以最佳配比（齐墩果酸：熊果酸= 3：1）混合后，体内调节维生素D3代谢酶活性作用优于齐墩果酸单用，此最佳配比已申请专利。而且，本课题首次获得能够调控肾脏维生素D代谢酶的功能性物质，不仅为骨质疏松症、包括其它因维生素D缺乏、钙代谢失衡等引起的相关疾病的防治提供了潜在功效物质，也从分子营养学的角度对补肾中药发挥补益功效提供分子依据。