脑胶质瘤是颅内最常见的具有高复发率和高死亡率特点的恶性肿瘤，目前的治疗方法均不能显著延长高级别（III-IV级）脑胶质瘤患者的生存期。程序性坏死诱导剂的发现为探讨脑胶质瘤的治疗理论和策略提供了一个新的思路。我们前期研究发现程序性坏死诱导剂紫草素显著抑制了大鼠脑内C6胶质瘤细胞的生长，体外研究显示紫草素激活了胶质瘤细胞内由受体相互作用蛋白激酶1（RIP-1）介导的程序性坏死通路。但是，在紫草素的作用下，胶质瘤细胞内调节RIP-1表达的上游信号分子、RIP-1表达后的激活机制以及激活后的下游信号途径等问题尚不清楚。因此，在本课题中，我们拟采用体外培养的胶质瘤细胞系以及接种到裸鼠皮下和大鼠脑内的胶质瘤细胞为研究对象，采用RNA干扰、免疫沉降、蛋白印迹分析等方法对以上问题进行探讨。我们期望通过该研究，明确脑胶质瘤细胞中程序性坏死发生的机制以及诱导程序性坏死在脑胶质瘤治疗中的作用。

Glioma is the most common intracranial malignant tumor with higher recurrence and mortality, but current treatment could not extend the life time of the patients with higher grade gliomas. The finding of necroptosis inducer shines a light on developing new treatment strategy and theory of gliomas. Our prior study showed that necroptosis inducer shikonin kills significantly C6 glioma cells in vitro and in vivo, and the inv vitro results showed that the effect is associated closely with higher expression of RIP-1, which is thought to play a pivotal role in mediating necroptosis. However, it is still unclear the mechanism underlying the activation of RIP-1 and its subsequent biological effects. In this project, we will investigate the mechanism underlying RIP-1 activation in gliomas and the role of ERK and JNK pathways in necroptosis, by using glioma cell lines in vitro and transplanted glioma cells in vivo. We hope that, via this study, it could be clarified the mechanism underlying glioma necroptosis and the effects of necroptosis induction in glioma treatment.

脑胶质瘤颅内常见的原发性恶性肿瘤，目前尚缺乏有效的治疗方法。程序性坏死是由受体相互作用蛋白1（RIP1）和3（RIP3）调控的新型细胞程序性死亡方式。我们在以往研究证实紫草素能够诱导胶质瘤细胞的程序性坏死的基础上，采用了体外培养胶质瘤细胞瘤以及裸鼠皮下接种胶质瘤细胞模型，应用MTT检测细胞增殖能力、LDH释放检查细胞死亡、平板克隆实验、蛋白印迹分析、免疫共沉淀分析、RNA沉默、透射电镜检查、荧光显微镜检测、彗星实验、ATP检测、丙酮酸检测、葡萄糖-6-磷酸检测、乳酸检测等研究方法，探讨了紫草素诱导胶质瘤细胞的发生程序性坏死的机制。我们发现：1、紫草素对不仅能够上调胶质瘤细胞中RIP1和RIP3的表达，还能增强其相互作用，促进了Necrosome的形成。这不仅与紫草素抑制Caspase8的表达，提高CYLD的表达有密切关系，还与细胞内活性氧的含量增加有关；抑制细胞中的活性氧，能够降低RIP1和RIP3的表达水平，还抑制了RIP1和RIP3之间的相互作用和Necrosomed的形成。2、RIP1和RIP3调节胶质瘤细胞程序性坏死与其导致DNA双链断裂有密切关系。RIP1和RIP3对胶质瘤细胞DNA双链断裂的调节作用是通过提高线粒体活性氧的生成、以及抑制细胞中抗氧化剂谷胱甘肽的含量有关。3、RIP1和RIP3的激活导致了胶质瘤细胞中糖酵解代谢障碍以及丙酮酸的耗竭。这与RIP1和RIP3抑制己糖激酶和丙酮酸激酶有密切关系。通过本研究，我们证实紫草素是一种有效的程序性坏死诱导剂，也是治疗脑胶质瘤的潜在药物。