复方中药的药效物质、质量控制与作用机制是限制中药运用发展的瓶颈。促孕复方为多年临床经验方药进一步经COH着床障碍模型优选处方，DS1-47为继续运用COH模型从该方中筛选得到的有效部位（其中总黄酮含量33.78%，总皂苷含量40.42%），其促进着床效果得到提高且对正常妊娠未见不良影响。本研究将运用LC-MS对DS1-47进行指纹图谱分析，用代谢组学方法研究DS1-47在小鼠体内经代谢后在血清中的化学成分图谱，将血清成分图谱与原指纹图谱进行对照，运用主成分分析法结合药效评价确定其主要药效化学成分，并建立DS1-47有效质量控制标准。此外，用蛋白组学LCM-DE-MS技术路线研究分析DS1-47作用后在子宫、卵巢组织细胞中受调节的蛋白分子，阐明其药效作用机制。本课题研究将为研发质量可控、主要药效物质清楚及作用机制明确的现代促孕中药新药奠定坚实的基础。

The use of Traditional Chinese recipe is limited because of unclear of its effective substances,mechanism and quality control.Cuyun Recipe has been screened out from several experienced formulae used in clinic for many years by controlled ovarian hyperstimulation(COH) embryo implantation dysfunction(EID) model,The bioactive part DS1-47(contained 33.78 percent of total flavone,40.42 percent of total saponin) was extracted from this recipe and screened by EID model induced by COH,the effect on improving implantation improved and without adverse effect on natural pregnancy.In this study,the special finger print of DS1-47 will be investigated by LC-MS, and the spectum of chemical constitutions in serum will be investigate by metabonomics research method,and then to make clear the effective chemical constitutions by the contrast of the original finger print and the serum ingredients after DS1-47 absorption,then to establish the method of DS1-47 quality control according to the testified important chemicals and its effect on improving implantation.On the other hand,special effective biomarker in uterus and ovaries regulated by DS1-47 will also be studied to expound the overall mechanism by using proteomics research method and LCM-DE-MS route.So all these work will lay good foundation for a new modern Chinese herbal medicine of improving implantation with real quality controllable,relative clear effective chemical constitutions and clear mechanism.

对促孕复方进行梯度极性系统的萃取和柱层析分离，结合COS着床障碍动物模型筛选促着床活性成分，对活性组分进行单一法与去一法筛选，确定得到由14个部位组成的活性组合成分，命名为DS-1-47。制定了DS-1-47的液相指纹图谱技术参数，有13个共有峰，相似度在0.94以上。分别运用超排卵模型和吲哚美辛着床障碍小鼠模型，蛋白组学激光捕捉显微切割技术-二维电泳-质谱 (laser capture microdissection-double dimensional electrophoresis-mass spectrum，LCM-DE-MS)筛选DS-1-47促着床的靶点蛋白质。方法为将各组子宫组织粉碎，进行双向凝胶电泳实验，染色，扫描胶条，分析凝胶电泳图，进行蛋白质差异化比较，得到含量改变的蛋白质，选取有显著性变化的蛋白质点做质谱分析。超排卵模型中，正常（CN）组、超排卵模型（CM）组和超排卵模型中药（CZ）组有15种蛋白质表达发生明显改变。和CN组相比，CM组有3种蛋白质明显表达下调，CZ组较之CM组明显表达上调；有12种蛋白质CM组较之CN组明显上调，但是CZ组较之CM组明显下调；CM组上调， 但是CZ组下调的蛋白质被鉴定为血液结合素，肌肽原-1、丝氨酸蛋白酶抑制剂A3K、α-1-抗胰蛋白酶1-3，结合珠蛋白、延伸因子-1-Δ、膜联蛋白A5、血清淀粉样蛋白P-成分；CM组下调但是CZ组上调的蛋白质为肝羧酸酯酶、丝氨酸蛋白酶抑制剂、载脂蛋白A-I。吲哚美辛模型中，正常（IN）组、吲哚美辛模型（IM）组和吲哚美辛中药（IZ）组有23种蛋白质表达发生明显改变，和IN组相比，有7种蛋白质IM组较之IN组明显下调，但是IZ组较之IM组明显上调；有16种蛋白质IM组较之IN组明显上调，但是IZ组较之IM组明显下调；除了一些结构构成性蛋白，下调的蛋白包括胶原蛋白 α-1 (VI) 链，角蛋白7，角蛋白14，肌球蛋白调节轻链12B，肌球蛋白轻多肽9，热休克蛋白β-7，C-U-编辑酶APOBEC-2；上调的重要蛋白包括载脂蛋白A-I，钙调蛋白3，增生细胞核抗原，L-木酮糖还原酶，钙结合蛋白。总之，发现下调的蛋白多与应激和免疫相关，上调的蛋白多与增生相关，这些蛋白均是参与调节着床的重要蛋白，也表明了LCM-DE-MSl方法筛选中药调节着床靶点分子有一定的科学意义。