三阴性乳腺癌是预后最差的一种亚型。抗血管生成药物治疗三阴性晚期乳腺癌，客观有效率高，无疾病进展时间长，但并未提高总生存。为使获益最大化，阐明抗血管生成药物的耐药机制显得尤为重要。我们前期研究发现分子伴侣蛋白GRP78高表达与接受抗血管生成药物治疗患者的预后差相关；GRP78表达降低可提高化疗药物的敏感性。本课题拟利用体外细胞毒性试验和体内移植瘤模型及内皮细胞三维培养实验等，通过人为调控GRP78的表达水平，研究微生态系统中肿瘤细胞和血管内皮细胞对抗血管生成药物的敏感性变化，以及这些细胞之间的交互作用。同时，探寻能够有效下调GRP78或能够与抗血管药物发生协同作用的药物，从而逆转其耐药，最终达到提高疗效。

Triple-negative breast cancer is the molecular subtype with the poorest prognosis. Antiangiogenesis drugs have a high objective response rate and can prolong the progression-free survival,but not overall survival. To derive the maximum bebefit from these drugs, we focus on drug resistance. Our previous results show that higher expression of GRP78, a molecular chaperone, is associated with a poorer prognosis in patients who have been treated with antiangiogenesis drugs; down-regulation of GRP78 can increase sensitivity of chemotherapeutic agents. Using in vitro cytotoxicity assay, in vivo triple-negative breast cancer model in nude mice,three dimensional angiogenesis model, etc.,manipulation of GRP78 expression levels in vascular endothelial cell lines and triple negative breast cancer cell lines will be done to explore correlations between resistance and expression status of GRP78 and to elucidate detailed mechanism of drug resistance in the tumor microecosystem. Simultaneously, drugs which can downregulate GRP78 expression or have a synergist effect with antiangiogenic drugs will be also explored to overcome drug resistance and to improve efficacy.

乳腺癌是锦年来世界范围内备受关注的恶性肿瘤之一，每年新发病例数稳居女性恶性肿瘤之首。GRP78（Glucose-regulated protein 78）是细胞参与内质网应激的一个关键分子之一，调控内质网蛋白的加工，维持内质网自稳态和调控细胞信号转导和细胞的命运，与高恶性、高侵袭性、放化疗耐药、乳腺癌复发及预后相关。MicroRNA是长度在18~25个核苷酸的内源性非编码小分子RNA，具有转录后基因调控功能，与肿瘤迁移、侵袭、黏附和上皮-间充质转化（Epithelial-mesenchymal transition，EMT）等多个肿瘤转移关键步骤中均有microRNA参与调控，起到类似癌基因或抑癌基因的作用。MiroRNA-21被证实在许多肿瘤中过度激活，起到类似癌基因的作用，并与肿瘤侵袭、转移、药物敏感性有关。吉西他滨是一种核苷类似物，对乳腺癌等实体肿瘤具广谱抗肿瘤活性。对早期治疗失败的局部复发或远处转移的晚期乳腺癌患者，吉西他滨常与其他化疗药物联用作为晚期一线用药并显示出良好疗效，但经治疗后仍有一部分患者出现耐药，导致治疗失败。本研究主要内容探索GRP78与乳腺癌转移及吉西他滨耐药的关系并进一步探索具体调控机制，同时探索吉西他滨耐药中MicroRNA-21的作用。本研究结果发现，乳腺癌中具有较高转移倾向的三阴性乳腺癌、HER2阳性乳腺癌GRP78的表达比激素受体阳性乳腺癌更高，GRP78的上调可以促进乳腺癌细胞生长增殖、迁移侵袭的能力，反之GRP78的下调可抑制其功能，在吉西他滨耐药细胞株中GRP78的表达比亲代吉西他滨敏感型细胞株明显高，下调GRP78可以使乳腺癌细胞增加吉西他滨敏感性，反之亦然。进一步探索机制发现GRP78可通过上下调caspase9（p37）来调节乳腺癌细胞对吉西他滨药物的敏感性而非通过caspase8的通路，提示其通过线粒体凋亡通路途径而非内质网钙释放途径，接着通过AKT及Bcl-2家族的相应变化验证了该假设。就吉西他滨耐药的情况探索MicroRNA-21在其中作用，结果发现microRNA-21参与乳腺癌吉西他滨耐药，探索机制提示其通过PTEN/AKT介导的EMT途径调控吉西他滨耐药。该研究提示GRP78与MicroRNA-21可作为抗乳腺癌耐药治疗的新着力点。