大肠下合穴、募穴、背俞穴为治疗肠腑病的主要穴位，经典文献及新近研究认为它们在调节肠效应的性质及量方面均存在差异，应用不当则降低效应，这一机制尚未得到研究。本研究结合肠神经系统研究进展，提出"肠腑合募俞均可调节肠功能，但其效应存在差异，肠神经系统及其与自主神经系统的复杂调节关系，可能是这一差异的关键机制之一"的假说，拟以功能性便秘动物模型、TRPV1基因敲除小鼠、胆碱能受体M2和M3及肾上腺素能受体β1和β2基因除小鼠为研究对象，观察不同刺激量（1、3、5mA）分别电针刺激大肠合募俞（上巨虚、天枢及大肠俞）对肠功能的调节效应的差异，分析其调节效应与肠神经元总体变化、肠感觉神经传入和运动神经元之间的关系，以判断肠神经系统及自主神经系统在合募俞调节肠功能效应差异方面的作用。阐明穴位特异性中穴位性质的影响因素，揭示其机制，为临床合理用穴提高疗效提供依据。

Lower He-sea,Front-Mu and Back-Shu points constitute the main points in the treatment of enteropathy, and used compatibly. Classic literature and recent studies suggest that there are differences in the nature and quantity in the regulation of intestinal effects among them, and compatibility improper would lower the effect, while the underlying mechanism is unclere. Hypothesis that the complicate relationship between enteric nervous system and autonomic nervous system, one of the key mechamisms, may responsible for the difference of Lower He-sea,Front-Mu and Back-Shu points in regulating intestinal function was raised based on the review on the progress of enteric nervous system. Functional constipation animals models, TRPV1-/-, M2-/- M3-/- and β1-/-β2-/-mice are subjected to EA stimulation at acupoint shangjuxu (ST37), tianshu(ST25), and dachangshu(BL25) at a different intensity (1, 3 or 5 mA) to determine the difference of the acupoints in regulation of constipation.Conditional effect of acupuncture and its relationship with enteric neurons overall change, the intestinal feeling and motor neuron will be analyzed, to demonstrated the role of enteric nervous system and autonomic nervous system in the difference of Lower He-sea,Front-Mu and Back-Shu points in regulating intestinal function, which will provide the basis for rational clinical use in improving efficacy.

本项目首先建立了小鼠功能性便秘模型，通过冷饮刺激，可以在不依赖药物的状态下诱导小鼠出现便秘症状，且可稳定持续一段时间，持续的冷饮刺激会引起肠神经形态和功能出现异常。在便秘小鼠给予电针上巨虚和天枢治疗后都可以缓解便秘症状，但二者在改变便秘小鼠的粪便重量、粪便性状和肠道功能上效应并不完全一致。在便秘小鼠的远端结直肠部位，二者均具有促进作用，而在便秘小鼠的近端结肠部位，上巨虚具有促进作用，天枢无明显作用。研究发现这种效应与两穴对肠神经的调节相关：上巨虚对便秘小鼠近端结肠ENS有调节作用，而天枢无明显作用，上巨虚可以下调高表达的氮能神经元标志物nNOS至正常水平，同时上调低表达的胆碱能神经元标志物ChAT至正常水平；天枢只能下调高表达的氮能神经元标志物nNOS至正常水平。表明上巨虚和天枢在影响ENS中不同类型的神经元的效应存在差异。通过比较电针正常小鼠、特定受体敲除小鼠调节胃肠运动的效应特征，观察到电针腹背部（天枢、大肠俞）主要由交感神经介导其效应，β1-/-β2-/-受体敲除后，增加刺激量2倍才能引进相应的效应；四肢部穴位（曲池、上巨虚）主要由副交感神经介导效应，M2-/-M3-/-受体敲除影响效应量明显。通过对交感初级中枢脊髓侧角的研究，观察到针刺时不同穴位均有交感信号传入与传出，且有效信号以交感兴奋为主；腹背部穴位交感信号有效传入、传出均大于四肢部穴位，提示腹背部穴位神经信号通路与四肢部穴位存在差异，腹背部穴位信号与交感神经关系更为密切。本项目初步明确了大肠合、募、俞穴在调节胃肠运动的效应特征方面存在显著差异，这种差异与不同部位腧穴的感觉信号传入特性及调节不同靶点的肠神经元表达及功能相关，为临床合理选穴提供了依据。项目取得成果27项（期刊发表论文26篇，其中SCI源期刊7篇）主编研究生教材1部、获得中国针灸学会科学技术二等奖1项，培养硕士生8名，博士研究生3名。