光动力治疗（PDT）已成为胆管癌治疗的重要手段之一，但是PDT与化疗等一样面临肿瘤易于复发和对治疗抵抗的特点，机制不明。我们前期临床研究发现PDT对胆管癌有良好的疗效，如果能在腔镜下局部注射光敏剂至胆管癌周围，然后进行光照治疗，效果更佳。根据肿瘤干细胞可能是肿瘤复发的原因之一，提出靶向针对胆管癌干细胞的方法结合PDT治疗方案，即胆管癌干细胞表面标志物（如CD133、CD24、EpCAM、CD44）单克隆抗体偶联的m-THPC纳米脂质体光敏剂结合PDT治疗，促进胆管癌干细胞吸收光敏剂，从而提高PDT杀伤效果。为了证明该假说，在体外和动物模型中研究以上单抗偶联m-THPC纳米脂质体光敏剂结合PDT对肿瘤的杀伤作用，及其坏死、凋亡、内质网应激机制。本课题为PDT结合靶向针对胆管癌干细胞的治疗方法，为胆管癌的PDT治疗提供了新的思路，也为将来优化PDT的方案提供前期工作基础。

Photodynamic therapy (PTD) is an important treatment method for cholangiocarcinoma, but is faced with challenges such as cancer recurrence and resistance. Our previous research found that injection of photosensitizer to the tissues around cholangiocarcinoma can improve the efficacy of PTD. Our hypothesis is that using anti-CD133, CD24, EpCAM or CD44 monoclonal antibody-coupled nanoliposome photosensitizer to improve the efficacy of photodynamic therapy for cholangiocarcinoma by targeting the cancer stem cells. This proposal aims to investigate the effects and its possible mechanisms of the above-mentioned monoclonal antibody-coupled nanoliposome photosensitizer in PTD regarding necrosis, apoptosis, and endoplasmic reticulum stress both in vitro and in vivo. This study may help to optimize the PTD for the treatment of cholangiocarcinoma.

根据肿瘤干细胞可能是肿瘤复发的原因之一，课题组通过无血清培养法及流式细胞分选法，得到CD133+ EpCAMhigh胆管癌干细胞样细胞，并证实CD133+ EpCAMhigh胆管癌干细胞样细胞具有干细胞特性，其较胆管癌QBC-939细胞单克隆形成率明显增高，增殖速率明显加快，对洛铂的耐药性更高，干细胞相关核转录因子OCT-4、Bmi-1较高，而E-cadherin含量较低，在小鼠体内成瘤率也明显增强，证实了本项目的科学假说之一：胆管癌干细胞可能是胆管癌复发的关键因素；然后，课题组应用未经纳米脂质体包装的光敏剂，证实了与普通胆管癌细胞一样，胆管癌干细胞可以被光动力疗法杀灭；接下来，课题组利用脂质体纳米包装技术，成功包裹了脂质体光敏剂，测定纳米脂质体粒子的表征、纳米脂质体的毒性及生物相容性、纳米脂质体的制备及体外释放检测，证实纳米脂质体包裹光敏剂可以增加其水溶性，增强了对胆管癌细胞的亲和性，是药物良好载体。本课题针对胆管癌复发重要因素胆管癌干细胞的治疗方法（新型靶向PDT）初步得到证实，为胆管癌的PDT治疗提供了新的思路，获得了胆管癌干细胞、掌握了主动和被动包装纳米脂质体光敏剂的方法，也为将来进一步研究单克隆抗体偶联光敏剂、开展机制研究、优化PDT的方案提供前期工作基础。