肝癌术后休眠是近来的研究热点，但其机制不明。基于前期基础及其他学者的研究，我们认为miR-570调控的B7-H1/PD-1通路通在肝癌细胞术后休眠的中有重要作用。本项目拟以肝癌术后休眠/复发小鼠模型为研究对象，运用小动物PET/CT成像技术及qRT-PCR、Western blot、miRNA mimics等技术，先研究健脾化瘀方对肝癌术后休眠、术后复发模型小鼠体内miR-570、B7-H1、B7-H1 mRNA、AFP mRNA的表达水平及脾脏、血液中的CD4+、CD8+T淋巴细胞亚群表达情况及其比值；再从体外研究健脾化瘀方对肝癌术后休眠、术后复发模型小鼠脾淋巴细胞对正常表达miR-570和过表达miR-570的肝癌细胞杀伤活性的影响。通过上述研究阐明miR-570/B7-H1/PD-1通路介导的免疫抑制性环境在肝癌休眠中的作用及健脾化瘀方的作用。

Postoperative recurrent of liver cancer was a recently research hotspot, but the mechanism of the dormancy was not clear. Based on other scholars' and our preliminary research, we suspect the miR-570/B7-H1/PD-1 pathway plays an important role in the dormancy of liver cancer. We choose the small animal PET/CT imaging technology, qRT-PCR, Western blot and miRNA Mimics technologies to research tumor recurrent on the mice models. Firstly, we research the influence of the Jianpihuayu decoction on the miR-570, B7-H1, B7-H1 mRNA expression levels and the CD4+, CD8+ T lymphocyte subsets expression and their ratio on the tumor dormancy/recurrent models. Then, we research the influence of the Jianpihuayu decoction on the tumor killing activity of the spleen lymphocytes of the tumor dormancy/recurrent models to normal and high expressive miR-570 H22 cell. This study will reveal the role of miR-570/B7-H1/PD-1 pathway mediated immunosuppressive environment in the tumor dormancy/recurrent and the effect of Jianpihuayu decoction.

目的：阐明miR-570调控的B7-H1/PD-1通路通在肝癌细胞术后休眠中的作用及健脾化瘀方的作用及机制。方法：（1）体外实验：选择HepG-2细胞，转染miRNA570并检测不同时间点各组miRNA-570、B7-H1表达，细胞的增殖、迁移、凋亡情况以及健脾化瘀方作用。（2）体内实验：a. 以HepG-2细胞建立肝癌术后休眠裸鼠模型，并观察健脾化瘀方对肝癌术后肿瘤休眠的影响。b. 构建过表达miR-570的人源肝癌SMCC-7721细胞，以此建立肝原位癌术后裸鼠模型，用PET/CT、病理学检查评估肿瘤复发情况，qRT-PCR、Western blot等技术检测miR-570、B7-H1的表达水平，流式细胞术检测CD4+、CD8+T淋巴细胞亚群表达情况及健脾化瘀方对肝原位癌术后裸鼠模型肿瘤休眠、复发的作用及机制。结果：（1）体外实验：与NC组比较，miRNA-570组的miRNA-570表达明显升高、B7-H1表达明显下降，B7-H1 mRNA表达无明显差异。miRNA-570组的细胞的殖减弱、迁移下降，侵袭能力降低、凋亡增多。健脾化瘀方对HepG-2细胞的增殖有抑制作用，健脾化瘀方的IC50值为6.8872mg/ml。健脾化瘀方可以使HepG-2细胞的侵袭能力降低、凋亡增多。（2）体内实验：建立裸鼠肝癌术后休眠模型，空白对照组休眠率为0，中药低、中剂量组的休眠率分别为80%和60%。建立肝原位癌术后裸鼠模型，小动物PET/C示NC组的高摄取区域范围较miR-570组增大。与NC组比，miR-570组复发率有所下降，miR-570组的转移灶数量显著减少；miR-570组中miR-570表达明显升高、B7-H1的表达明显降低，miR-570组的T淋巴细胞亚型发生明显改变，CD4+细胞水平、CD4+/CD8+比值明显升高，CD8+细胞水平明显下降。药物干预后，5-FU组、健脾化瘀方组的复发率、转移灶数量有所减少；与NC组比较，健脾化瘀方组和5-FU组的转移灶数量显著降低、miRNA-570表达升高、B7-H1表达降低、外周血及脾脏中CD4+细胞水平、CD4+/CD8+比值均明显升高，CD8+细胞水平显著下降。结论：健脾化瘀方通过上调miR-570而抑制B7-H1/PD-1通路，从而抑制肝癌细胞的增殖和侵袭，诱导肝癌细胞的凋亡，促进肝癌术后休眠。