多药耐药是影响大肠癌化疗疗效的重要因素之一，MDR1及编码的P-gp蛋白在多药耐药中发挥重要作用，研究发现JNK信号通路介导MDR1/P-gp引起大肠癌耐药，但JNK信号通路的激活途径尚不清楚。 前期研究发现miR-200c调节MDR1/P-gp水平，并与c-Jun磷酸化水平呈负相关，左金丸能增加大肠癌对化疗药的敏感性，上调miR-200c。我们推测miR-200c激活JNK信号通路可能是大肠癌多药耐药的重要机制。本研究构建JNK2基因3'UTR荧光素酶报告基因、miR-200c的慢病毒载体，采用质粒转染，RNAi等技术，研究miR-200c通过JNK调节大肠癌多药耐药的机制，及左金丸对miR-200c分子表达的调控作用，并深入研究左金丸调节miR-200c抑制JNK信号通路调节MDR1/P-gp的机制，这对于揭示大肠癌多药耐药的机制，明确中药逆转大肠癌多药耐药的作用靶点具有重要的科学意。

The clinical use of chemotherapeutic drugs in colorectal cancer treatment is limited by the occurrence of multidrug resistance (MDR). MDR1/P-gp has been confirmed as the most important gene induced multidrug resistance. However, the underlying mechanism of the regulation MDR1/P-gp remains unknown. Our previous studies showed that miR-200c induced up-regulation of MDR1/P-gp, which was associated with an enhanced activity of JNK signal transduction. Other researches also confirmed that Zuo-Jin-Wan reversal MDR by inhibiting the expression of P-gp in colorectal cancer, but the target is still unclear. In this study, we built miR-200c recombinant lentivirus by overexpression. Molecular cloning, in vivo imaging of system, ICP-MS, Western blot and other experimental techniques will be used to explore the mechanism of drug-resistance aroused by oxaliplatin in vitro and in vivo, as well as to investigate the effects of Zuo-Jin-Wan on miR-200c/JNK signaling in colorectal cancer. It will be helpful to find the target in the prevention and treatment of drug-resistance tumor.

多药耐药是影响大肠癌化疗疗效的重要因素之一，MDR1及编码的P-gp蛋白在多药耐药中发挥重要作用，研究发现JNK信号通路介导MDR1/P-gp引起大肠癌耐药，但JNK信号通路的激活途径尚不清楚。因此本研究利用miRNA表达谱芯片筛选耐药细胞和敏感细胞之间表达差异明显的miRNA分子；通过生物信息学分析，以ABCB1基因和JNK信号通路上的JNK2基因为靶点的miRNA分子；两者交叉对比，筛选两个基因为靶点的表达差异明显的miRNA分子。发现与大肠癌敏感细胞相比，耐药细胞中的miR-200c表达降低；生物信息分析学结果显示JNK23’UTR区是miR-200c的作用靶点之一；miR-200c模拟物能够上调miR-200c的表达、降低JNK2 mRNA和P-gp的表达，且呈剂量依赖性。采用分子克隆，慢病毒感染等技术，建立miR-200c过表达大肠癌裸鼠皮下移植瘤耐药模型，通过小动物活体成像技术观察miR-200c/JNK2信号通路在裸鼠体内的活化情况，证实miR-200c靶向JNK2基因，激活JNK信号通路是大肠癌发生多药耐药的重要因素。发现左金丸具有上调miR-200c，抑制JNK2表达，阻断JNK信号通路激活的调节作用；证实左金丸通过miR-200c/ JNK2/P-gp信号途径增加大肠癌化疗敏感性，逆转耐药的抗肿瘤作用。这对于揭示大肠癌多药耐药的机制，明确中药逆转大肠癌多药耐药的作用靶点具有重要的科学意义。标注该课题的文章11篇，其中SCI收录5篇。授权国家发明专利1项，培养硕士研究生2名。