三阴性乳腺癌(TNBC)是指雌激素受体、孕激素受体和人类表皮生长因子受体2均为阴性的高危乳腺癌，约占乳腺癌的15%。其肿瘤细胞具有分化差，侵袭性强，更接近干细胞样的特点。尽管TNBC通常对化疗药物有较高的反应比例，但远期预后较差。临床研究结果显示，PIK3CA基因突变的TNBC患者新辅助化疗后肿瘤残存比率高，随访预后很差。因此，为了进一步探讨PIK3CA突变的TNBC耐化疗药物的分子机理，本课题拟在前期研究的基础上，利用TNBC细胞MDA-MB-231建立PIK3CA突变的乳腺癌细胞和TNBC裸鼠模型，通过对PIK3CA有/无突变的不同分子亚型的细胞和动物模型进行抗药性筛选，在细胞和动物水平上研究其发生发展、转移和抗化疗药物的作用机理，寻找可用于临床治疗和监测的分子靶点，为TNBC的防治提供理论依据，为新药筛选提供新的治疗策略和手段，并为临床应用奠定基础。

Triple-negative breast cancer (TNBC) is which estrogen receptor (ER), proges-.terone receptor (PR) and human epidermal growth factor receptor 2 (HER2) are.negative breast cancer. It is accounting for about 15% of breast cancer. The.characteristics of TNBC tumor cells are poorly differentiated, invasive, clo-.ser to the stem cell. Although TNBC usually has a higher proportion of res-.ponse to chemotherapy drugs, the long-term prognosis is poor. The clinical.results demonstrate that it has the high ratio of residual tumor for PIK3CA.gene mutations in patients with TNBC after adjuvant chemotherapy, and the.follow-up prognosis is poor. In order to further explore the molecular me-.chanism of drug resistance of TNBC, we use TNBC cell MDA-MB-231 to establish.cell and tumor model of PIK3CA mutations based on the previous studies. The.mechanism of the development, metastasis and resistance to chemotherapy drugs.will be done using PIK3CA mutant cells and animal models. It can be used to.provide a theoretical basis for the prevention and treatment of TNBC, new.therapeutic strategies and means for screening for new drugs, and to lay.the foundation for the clinical application.

PIK3CA 基因突变通过 PI3K/Akt 途径引发 Akt 持续活化, 促进乳腺癌肿瘤细胞的生长,并抑制细胞凋亡。本课题通过构建PIK3CA突变的三阴性乳腺癌细胞系，结合细胞生物学、分子生物学等方法与技术，对PIK3CA 突变引起三阴性乳腺癌细胞系MDA-MB-231的生长、和凋亡的影响进行了初步研究。首先通过利用慢病毒载体建立 PIK3CA 野生型(WT)、PIK3CA 突变型(E545K 突变，突变位点位于 exon 9 和 H1047R 突变，突变位点位于 exon 20)的 MDA-MB-231 细胞系，测定了Akt、STAT3/5、mTOR、PTEN 等下游信号分子的激活情况，并在转录水平上验证；建立PIK3CA 突变的 TNBC NOD-SCID老鼠模型，检测PIK3CA 突变在 TNBC 动物化疗抵抗中作用及分子机制，并在TNBC 临床标本中 PIK3CA 突变对 TNBC 耐药功能再验证。我们发现PIK3CA 突变会抑制对表柔比星耐药的三阴性乳腺癌细胞发生凋亡。同时在临床实践中，我们发现PIK3CA突变基因是与乳腺癌相关的热点突变基因，其血液中的 ctDNA变化较CTCs和核磁共振影像结果更能提前反映乳腺癌治疗效果。提示 PIK3CA 突变的血液中 ctDNA 有可能作为新的疗效评价指标，应用于进展期乳腺癌术前化疗。另外我们发现矢车菊素-3-O-葡萄糖苷（Cy-3-glu）优先促进表达同时表达ERα36和EGFR的TNBC细胞的凋亡。我们证明Cy-3-glu直接与ERα36的配体结合结构域结合，抑制EGFR / AKT信号传导，并促进EGFR降解。 我们还在异种移植小鼠模型中证实了Cy-3-glu在TNBC上的治疗效果。我们的数据表明，Cy-3-glu可能是针对TNBC共表达的ERα36/ EGFR的新型预防/治疗剂。