中文摘要
重金属是近年来渔业环境中最为严重的污染公害之一,严重影响着养殖动物的存活与生长。本项目在多年对华溪蟹属细胞与分子水平生殖发育研究的基础上,应用mRNA差异显示技术、单细胞凝胶电泳技术、波谱扫描技术、RAPD技术和酶活测定技术等高级生化与分子生物学实验手段与方法,重点研究镉、铅对华溪蟹幼体不同组织抗氧化酶活性的变化和mRNA差异转录、DNA损伤及DNA构象的改变。旨在通过研究,探明镉、铅对不同组织GSH、GST、GR、SOD、CAT等抗氧化酶活性的改变;比较特定组织或细胞来源样品之间转录水平的mRNA的定性和定量变化,找出DNA损伤的基因,揭示蟹类DNA损伤的分子机理;搞清DAN单链断裂的损伤程度及重金属的协同或拮抗作用;观察DNA构象的稳定性、作用模式及结合位点的数量变化;探索重金属污染与水生动物生殖细胞形成、受精率、幼体早期夭折、成体发育不良及容易感染疾病之间的内在联系。
结题摘要
该项目内容包括两大部分,一是酶活效应,①抗氧化系统主要酶分析,②线粒体部分代谢酶的变化,③ Na+-K+-ATPase对重金属的敏感程度及活性效应,二是遗传毒性,① mRNA的差异表达,② DNA损伤,③ DNA构象的改变,④ 随机扩增多态DNA(RAPD)。经过三年的研究,圆满并超额完成了计划任务,取得了一批标志性研究成果。共发表相关论文23篇,其中SCI核心期刊收录3篇,一级学科主学报9篇,二级学科主学报4篇,其他7篇;获山西省自然科学一、二等奖。查明了镉、铅对组织器官抗氧化酶(GSH、GST、GR等)的损伤程度,进一步明确了线粒体是最敏感和最早受到氧化损伤的靶细胞器。比较了组织之间转录水平mRNA的定性和定量变化,特别是经镉诱导金属硫蛋白(MT)的表达与镉蓄积状况,得到了纯度较高的华溪蟹MT,主要以单体及二聚体形式存在,并阐明了MT的一级结构,弥补了无脊椎动物MT研究的不足,为利用MT进行环境监测及重金属污染治理奠定了基础。揭示了DNA受损伤的分子机理,搞清了重金属协同或拮抗作用导致的DAN单链断裂的损伤程度,探明了DNA构象的稳定性、作用模式及结合位点的数量变化及构型的转变等。
