中文摘要
以拟南芥花粉和叶片保卫细胞为材料,利用数字比率荧光分析和膜片钳技术为主要手段,研究细胞质膜质子泵在质外体钙调素跨膜信号转导中的作用。利用细胞质膜质子泵特异性激活剂和抑制剂对其活性进行调控,确定质膜质子泵对细胞生理活动(花粉萌发、气孔运动)、细胞内钙离子浓度、细胞质膜电位以及细胞质膜钙通道活性的调控作用;然后,在质子泵活性受抑制条件下,测定质外体钙调素处理前后上述指标的变化,分析细胞质膜质子泵在质外体钙调素调控质膜钙通道活性、刺激细胞内钙信号产生、进而促进花粉萌发和气孔关闭的过程中发挥的作用。利用拟南芥异三聚体G蛋白相关突变体,分析G蛋白在质外体钙调素调控质膜质子泵活性过程中的作用。本课题对阐明质外体钙调素调控花粉萌发、气孔运动等生理过程的信号转导机制有重要的理论意义。
结题摘要
本项目以拟南芥花粉和叶片保卫细胞为材料,采用生理学、细胞学和电生理学方法,研究细胞质膜质子泵在质外体钙调素跨膜信号转导中的作用。利用细胞质膜质子泵特异性激活剂(壳梭孢菌素)和抑制剂(钒酸钠)对其活性进行调控,确定质膜质子泵对细胞生理活动(花粉萌发、气孔运动)、细胞内钙离子浓度、细胞质膜钙通道活性的调控作用。在质子泵活性受抑制条件下,测定质外体钙调素处理前后上述指标的变化,分析细胞质膜质子泵在质外体钙调素调控质膜钙通道活性、刺激细胞内钙信号产生、进而促进花粉萌发和气孔关闭的过程中发挥的作用。结果显示,细胞质膜质子泵可以调节花粉细胞质膜钙通道活性、促进细胞内钙信号的变化,在质外体钙调素调节花粉萌发和花粉管生长的过程中发挥介导作用。而在细胞外钙调素促进拟南芥气孔关闭的过程中,质子泵基本上不起作用,质外体钙调素可能是通过其他途径发挥作用的。
