鼠疫耶尔森氏菌是传染性强、致病力高的自然疫源性疾病鼠疫的病原体。鼠疫菌能在巨噬细胞中生存繁殖，并由此传播到宿主全身，因此鼠疫菌与巨噬细胞的相互作用是其致病的关键。通过鼠疫菌毒力相关蛋白芯片筛选实验，我们发现一些能与巨噬细胞蛋白相互结合的候选毒力因子。本研究选择其中的LcrG，YscW和YscB蛋白作为靶标，深入研究它们与巨噬细胞的相互作用。首先构建缺失相应基因的鼠疫菌突变株，研究突变株对巨噬细胞毒力和BALB/c小鼠毒力的变化，确定LcrG，YscB和YscW对鼠疫菌毒力的影响方式和程度；其次，利用细菌双杂交技术筛选小鼠巨噬细胞cDNA文库，确定LcrG，YscW和YscB作用的靶蛋白；第三，在体内外实验中验证这些鼠疫菌蛋白与小鼠巨噬细胞蛋白的相互作用，阐明它们参与鼠疫菌致病的机制。本研究将揭示新的鼠疫菌毒力因子及其与宿主巨噬细胞相互作用的机制，促进我们对鼠疫菌致病机制的认识

本研究以鼠疫菌三个已知与毒力相关蛋白LcrG，YscW，YscB为研究对象，构建了三种突变株，分析了突变株的巨噬细胞毒性和小鼠的LD50，发现突变株的毒力在细胞水平上和感染模型上都有显著下降。被突变株感染的巨噬细胞分泌TNF-alpha的能力显著低于野生型菌株，说明突变株不能象野生型菌株一样有效的抑制宿主的免疫响应。为了寻找他们在宿主体内的作用靶标，我们构建了小鼠J774A.1巨噬细胞的cDNA文库，采用细菌双杂交技术以LcrG和YscW为诱饵筛选小鼠巨噬细胞cDNA文库，分别获得了猎物分子Rlp3、Trx2和Rnf149。以YscB为诱饵筛选人脾脏cDNA文库获得了猎物分子PLSCR1，EFEMP2，TSG101，经酵母回转试验验证均为阳性。在此基础上系统的研究了yscW突变对巨噬细胞功能的影响。用yscW突变株感染巨噬细胞，发现巨噬细胞对yscW突变株和鸡红细胞的吞噬能力均显著大于野生型菌株，巨噬细胞的抗原提呈能力显著高于野生型菌株。研究结果初步阐明三种毒力因对鼠疫菌细胞毒性和小鼠毒性的影响，并且表明他们是抑制巨噬细胞的吞噬功能和抗原提呈能力所必须的。