恶性纤维组织细胞瘤（MFH）目前被认为是一种组织学来源及分化方向仍不明确的未分化多形性肉瘤（MFH/UPS）。它具有部分类似于间质干细胞（MSC）的分化潜能，并被认为可能是由MSC转化而来。最近研究显示未分化肉瘤与MSC具有显著的关联性。申请者在对MFH细胞系进行的研究中发现，MFH的X染色体存在结构异常，而位于X染色体的miR-222对比MSC细胞表达明显下调。因此申请者认为由于MSC中负责调控其早期分化的microRNA表达异常，诱导MSC分化成MFH肿瘤干细胞，其分化增殖失控发展成为MFH等未分化肉瘤。针对这一假设，申请者以前期实验发现的差异表达基因miR-222为目标，运用RNA干扰技术，检测miR-222的生物学功能，探讨miR-222与MFH发生的关系，及其对MSC分化的影响。同时通过裸鼠扩增MFH细胞，筛选分离肿瘤干细胞，对其细胞活性，特异性表面抗原及分化增殖能力进行分析。

研究目的：由于先期实验结果显示单独恢复在NMFH1细胞系中低表达的mir-222对MFH细胞的生长特性无显著影响，项目组将研究重点放在MFH肿瘤干细胞的分离鉴定以及运用基因芯片技术分析肿瘤干细胞与MFH肿瘤细胞的microRNA差异表达，确定MFH中发挥关键作用的microRNA。研究方法：选取NMFH1细胞系，SW982细胞系及HT1080细胞系，采用Hoechst33342染色测定，无血清悬浮培养体外集落（成球）分选，CD133标记免疫磁珠分选、CD133标记ALDH标记流式细胞仪分选技术。分离成功后选择NMFH1细胞系中ALDH阳性细胞与阴性细胞进行mircroRNA基因芯片对比分析。研究结果：NMFH1细胞通过无血清成球技术成功分离出MFH细胞球并证实具有干细胞特性。这三种细胞系又进行了CD133标记免疫磁珠分选，CD133标记及ALDH酶学标记后的流式细胞分选，结果显示NMFH1细胞系中CD133阳性率为1.05%，ALDH阳性率为1.74%，SW982细胞系中CD133阳性率为8.59%，HT1080细胞系中阳性率为8.40 %，阳性细胞具有干细胞特性。分选成功后对NMFH1细胞系中ALDH阳性细胞与阴性细胞进行基因芯片对比分析，筛选出两者存在差异表达的microRNA。经定量PCR确认在NMFH1肿瘤干样细胞中hsa-miR-206, 451a, 668-3p 呈现明显高表达。kshv-miR-K12-12-5p（卡波希氏瘤疱疹病毒microRNA家族）, hsa-miR-134-3p, 450a-5p, 487b-3p 呈现明显低表达。结论：无血清悬浮培养体外集落成球技术，免疫磁珠分选技术以及流式细胞仪分选技术均可以成功分离NMFH1肿瘤干样细胞，但CD133或ALDH标记流式细胞仪分选技术更适合进行后续研究。在NMFH1肿瘤干样细胞中hsa-miR-206, 451a, 668-3p 呈高表达，kshv-miR-K12-12-5p, hsa-miR-134-3p, 450a-5p, 487b-3p 呈低表达。这些异常表达的miRNA可能在肿瘤增殖转移过程中发挥重要作用。