中文摘要
植物半胱氨酸合酶(CS)催化半胱氨酸合成的最后一步反应,半胱氨酸除了可以用于蛋白质的合成外,还是一些含硫小分子代谢物(如GSH、MT、PCs等)的前体物,这些小分子含硫代谢物在植物抗金属离子毒害中发挥重要作用。本研究项目以已经克隆的一个水稻细胞质半胱氨酸合酶(RCS1)基因为基础,以已经对它初步的表达分析为依据,对该基因进行进一步的功能分析。构建RCS1基因不同的植物转化载体,转化水稻,检测转基因植株的表型及抗逆性,研究RCS1基因在水稻中过量表达和缺失表达后对水稻抗铝性的影响,并用Northern杂交和 Western Blotting技术对RCS1基因在水稻中的表达特性进行详细的分析。这一研究将有助于我们了解RCS1基因在水稻耐铝性中的作用,以期为培育抗逆作物新品种提供理论依据。
结题摘要
半胱氨酸合酶(CS)催化半胱氨酸合成的最后一步反应,半胱氨酸除了可以用于蛋白质的合成外,还是一些含硫小分子代谢物(如GSH、MTs、PCs等)的前体物,这些小分子含硫代谢物在植物抗金属离子毒害中发挥重要作用。本研究克隆了一个水稻细胞质半胱氨酸合酶基因(RCS1),构建了该基因的原核表达载体,并诱导表达,分离纯化后制备了多克隆抗体,并对其表达特性进行了分析;构建了RCS1基因的上调和下调表达的植物双元表达载体,转化中花11水稻,通过潮霉素筛选和分子检测获得转基因植株,并对其后代进行纯合;用Real-time PCR分析了转基因植株中目的基因RCS1的表达情况,结果显示RCS1在过表达转基因植株中的表达量平均上调了5.45倍多,且半胱氨酸合酶活性平均提高了2.3;在干涉表达的转基因植株中表达量平均下调了67.5%,半胱氨酸合酶活性平均下调了17.2%;进一步的功能分析表明,过量表达RCS1能提高水稻对铝毒和镉胁迫的抗性,而干涉RCS1表达的转基因水稻对铝毒和镉胁迫更加敏感,说明半胱氨酸合酶在水稻抗重金属胁迫中发挥重要作用。
