中文摘要
本研究用肝基质、宿主胚胎细胞饲养层培养日本血吸虫第I期卵黄细胞,在雄虫抽提物(或加外源性诱变剂)刺激下,促使培养卵黄细胞的大量分裂增殖;同时,可将具调控细胞分裂增殖作用的外源基因(ras基因)导入血吸虫培养卵黄细胞内,使ras基因在卵黄细胞内表达或整合到血吸虫基因组,最终实现目的基因在培养卵黄细胞内的持久表达,并发挥其促细胞增殖功能,引起卵黄细胞出现大量持续性增殖,进而建立培养细胞系。若能达到预期目的,不仅可为血吸虫病细胞疫苗、诊断抗原、转基因与基因组学研究提供大量的生物学材料与技术平台,而且将推动抗虫药物的筛选与机理的阐明,还将为雌雄虫体间相互作用的研究提供一个细胞模型,必将开创血吸虫生理学、生物化学、免疫学、药理学、细胞生物学、细胞遗传学、分子生物学、发育生物学研究的新局面,甚至开辟血吸虫病研究的新领域,具有重要的学术价值和广阔的应用前景。
结题摘要
本课题首次运用细胞化学和免疫组织化学方法显示日本血吸虫培养细胞的酸性蛋白、碱性蛋白、14-3-3信号蛋白(Sj14-3-3)以及培养细胞的抗原含量;研究在鼠胚胎成纤维细胞饲养层、肝基质等细胞外基质、亚精胺、MNNG、条件培养基、雄虫抽提物、恒温电磁场等单独与联合作用下,对日本血吸虫培养细胞核仁组织区相关嗜银蛋白(Ag-NORs)、乳酸脱氢酶(LDH)及其超微结构等的动态变化以及培养细胞分裂增殖的作用;并用MNNG直接诱导血吸虫虫体,再取其细胞作体外培养研究,结果均观察到培养细胞的分裂增殖现象,但传代培养后细胞日益减少,未能建立一个持续分裂的培养细胞系。本项目还将两种外源基因(曼氏血吸虫ras和HSP70基因)转染日本血吸虫培养细胞,未观察到外源基因的表达。上述研究不仅极大地丰富了血吸虫学的研究内容,而且为建立血吸虫持续分裂的培养细胞系以及转基因研究奠定了良好基础,也为血吸虫雌雄虫体间相互作用研究提供一个细胞模型,有助于血吸虫生理学、生物化学、免疫学、药理学、细胞生物学、细胞遗传学、分子生物学、发育生物学等的深入研究。
