中文摘要
对虾白斑综合症病毒(WSSV)是对虾爆发性疾病的主要病原,每年给全球对虾养殖业造成巨大经济损失。但是,到目前为止,人们对WSSV的侵染机制的了解还是十分有限。在病毒感染中,病毒的极早期基因对病毒早、后期基因的转录和表达,以及调控宿主蛋白功能等方面都起着非常关键的作用。在前期工作中,本研究小组以原代虾血细胞为感染体系结合DNA芯片杂交分析,已经筛选到27个WSSV病毒极早期基因的候选基因。为了进一步了解WSSV的侵染机理,本项目将以这些基因为基础,首先对其进行验证,然后通过生物信息学和RNAi方法来寻找带有重要功能区并在WSSV感染过程中影响其生活周期的基因。从中选取1-2个可能参与病毒复制转录或信号转导的基因进行深入研究,探讨其在病毒感染过程中的作用机制,特别是病毒感染与宿主细胞之间的关系。本研究将有助于阐明WSSV的侵染机制,且能为研发该病毒病的防治方法或药物提供基因靶点。
结题摘要
白斑综合症病毒(WSSV)是目前危害对虾养殖业最主要的病原体。至今,人们对WSSV的侵染机制仍不清楚。我们以原代虾血细胞为感染体系结合DNA芯片杂交分析,已经筛选到27个WSSV病毒极早期基因的候选基因。通过RT-PCR方法对这些候选基因进行验证,确认了16个WSSV的极早期基因,其中6个基因编码的蛋白具有重要的功能结构域。根据初步的功能分析以及已有的相关报道,这6个基因编码了4个转录因子,1个激酶以及1个泛素途径的E3连接酶。通过酵母双杂交方法对其中的IE1(wsv069)及其同源蛋白wsv056的相互作用蛋白进行了筛选,发现它们可与Rb和Med27结合,并通过CoIP实验进一步验证了IE1(wsv069),wsv056,两个蛋白与Rb的相互作用。进一步的研究表明,它们可能通过与Rb蛋白的结合,使更多的E2F游离出来,进而激发下游基因的表达。此外,RNA干扰实验的结果表明抑制IE1(wsv069)能够阻碍WSSV感染的进程,表明该蛋白对WSSV的感染起到关键性作用。本研究的结果将有助于阐明WSSV的侵染机制,且能为研发该病毒病的防治方法或药物提供基因靶点。
