研究肿瘤免疫微环境的形成机制及其干预策略是肿瘤学的重要研究领域。由于构成微环境的因素众多且不同因素间存在网络调节的复杂性，目前仍缺乏较好的策略来实现肿瘤微环境的逆转，这也影响了肿瘤免疫治疗的疗效。鉴于炎症是肿瘤免疫微环境的重要特征及NF-κB、STAT3-IL-6信号在致炎中的重要作用，提出利用miRNA多靶点整体性调节分子，通过对致炎信号分子的调节，有可能作为一种新的治疗策略来实现对肿瘤免疫微环境的精细调节。本研究根据前期文献和本课题组预实验结果，拟选用miR-155/miR-21这一组免疫相关miRNA作为肿瘤免疫微环境的调节因素进行研究，重点探索miRNA对肿瘤相关免疫抑制分子的影响（包括对MDSCs、TAM、T-Reg等肿瘤组织抑制性细胞的募集及与之相关的免疫抑制分子表达的调节）及其对肿瘤疫苗的增效作用和机制，从而提出新的针对肿瘤免疫微环境的治疗策略，促进肿瘤免疫治疗领域的发展。

本项目的目的是利用小鼠乳腺癌荷瘤模型，研究联合抑制miR-155和miR-21后对DC疫苗的增效作用。本项目采用采用慢病毒感染的方法分别构建了高表达和敲低miR-155和miR-21的小鼠乳腺癌细胞株4T1；利用real-time PCR的方法观察到高表达miR-155的4T1细胞株IL-10、CXCR4、TGF-β表达增加，而miR-21对上述细胞因子表达没有影响。进一步利用MTS方法观察到miR-21可促进4T细胞的增殖，transwell和划痕实验也观察到高表达miR-21的细胞侵袭能力提高。然而，高表达miR-155的4T1细胞株在体内外均表现为生长减缓，迁移能力及克隆形成能力也显著减弱。进一步分析miR-155高表达的4T1生长减缓的原因，发现细胞凋亡并不明显，细胞凋亡诱导caspase-3,9也未增高；也未见明显细胞阻滞现象，与G0/G1相关的细胞周期蛋白的表达及活性也未见明显改变。因此，miR-155诱导细胞生长减缓的确切机制将需进一步研究。制备高效的DC疫苗是本项目的另一重要内容。采用慢病毒感染的方法制备了敲低stat3和敲低socs1两种DC疫苗。流式细胞仪观察到敲低stat3后，可提高MHC II和CD86的表达及IL-12、IFN-γ的分泌，同时也可提高对T细胞的抗原呈递能力。敲低socs1的DC细胞，MHC II和CD86的表达没有明显改变，但IL-10表达明显下降，而IL-12p40表达明显增加。选取了Balb/c小鼠42只，给每只小鼠右侧腋下移植体外培养的小鼠乳腺癌细胞株4T1（1×105/只），然后将荷瘤小鼠分为7组：PBS组、DC对照联合miR-21对照、stat3/socs1敲低DC联合miR对照组,miR-21联合DC对照组、miR-21联合stat3/socs1敲低DC组。在移植肿瘤的第10d，瘤内注射抑制miR-21的质粒（100μg/只），3d后，瘤周注射不同的DC细胞（106/只）；5d后再次注射质粒和DC疫苗。结果观察到抑制miR-21联合stat3/socs1敲低DC组的小鼠肿瘤瘤块生长明显较PBS组减缓；另外，该组荷瘤鼠脾脏淋巴细胞内IFN-γ的表达、CTL的溶细胞活性也较对照组显著提高；而脾脏Teg的数目及肿瘤组织中MDSC抑制性细胞分布明显减少。