木质素的微生物降解是实现生物质资源高效转化利用、变废为宝、降低环境压力的根本途径。虽然近年来对白腐真菌分泌的木素过氧化物酶进行了较系统研究，但由于白腐真菌自身的生长局限性及未能克服真核微生物在原核中异源表达的瓶颈问题，一直未能成功构建出具有高效表达活性的基因工程菌株，从而应用于实际生产中。本项目拟以我们筛选到的高产木素过氧化物酶的假单孢菌株PKE117为研究对象，利用生物化学、遗传学、分子生物学等技术对其功能基因进行克隆、表达、功能分析以及表达蛋白的分离纯化和酶学特性、降解活性研究，构建出具有高LiP表达活性的基因工程菌株，填补白腐真菌在此方面的不足并促进其进一步快速发展。该研究将为阐明细菌源木素过氧化物酶与白腐真菌的异同、木素过氧化物酶的进化地位、基因调控机理以及工程菌的进一步工业化应用奠定理论和应用基础。

木质素的微生物降解是实现生物质资源高效转化利用、变废为宝、降低环境压力的根本途径。但由于白腐真菌自身生长的局限性及未能克服真核生物在原核中异源表达的瓶颈问题，一直未能成功构建出具有高效表达活性的工程菌株。本课题以实验室分离保藏的具有木质素降解能力的一株细菌Pseudomonas aeruginosa PKE117为研究材料，根据与PKE117同源性高的菌株P. aeruginosa PAO1中的过氧化物酶基因序列设计引物，将克隆得到的锰过氧化物酶基因dypPa转化入E. coli BL21中进行表达，通过SDS-PAGE分析和FPLC得知重组蛋白DyPPa主要以同源二聚体的形式存在，分子量为32.4 kDa，DyP-type过氧化物酶酶活力为3.08U/mg，DyPPa可耐受60℃，最适反应pH为3.5，最适底物为Reactive blue 5（RB5），1 mM的Al3+对酶活力有强烈的激活作用，残余酶活可达到142.68%。研究表明DyPPa是DyP-type过氧化物酶家族的一个新成员，是Pseudomonas中第一个确定为该家族成员的酶蛋白。