中文摘要
根据凝集素具有对特异性糖基专一结合的能力,利用芯片的高通量性,制备一种集多种凝集素为一体的凝集素芯片,该芯片可以直接捕获细胞。使用荧光扫描仪和荧光显微镜检测芯片上各凝集素点阵捕获细胞的荧光强度,可以对细胞膜表面的糖链结构进行检测和分析。该凝集素芯片可以直接检测细胞膜表面的糖链分布和结构,也可以单独用于糖蛋白的检测,为细胞膜糖链检测和分析建立了一个新的技术平台。应用该凝集素芯片研究不同组织来源的细胞、肿瘤细胞以及细胞周期内不同发育阶段细胞的细胞膜的糖链结构,分析细胞膜糖链结构的组织特异性,寻找肿瘤早期诊断标志物,分析细胞周期内糖链变化过程,阐释特征细胞膜糖链结构与功能变化的相关性、细胞糖链结构在细胞识别、细胞信号传导及其重大疾病的发生发展过程中的作用;进行疾病的检测及其诊断,为糖组学提供新的研究点。
结题摘要
细胞表面糖复合物在细胞识别、黏附、通信联络、免疫应答等方面起着重要作用,研究这些受时间和空间调控的聚糖表达模式,对了解聚糖在癌变过程中的作用有着重要意义.目前缺乏对细胞膜糖链进行即时、通量检测的技术方法,本课题构建了可以对细胞进行自动捕获、对细胞膜糖链进行即时、通量检测的凝集素芯片体系,并应用该体系对不同组织不同种属及其正常和癌组织细胞膜糖链进行检测。芯片利用凝集素对糖基的特异性亲和性与细胞膜表面的糖基结合捕获细胞,通过三种方法检测捕获的细胞:芯片扫描仪扫描检测捕获细胞的荧光信号,根据凝集素的特异性确定细胞膜表面糖表达谱;对芯片捕获的细胞进行常规HE染色光学显微镜下观察细胞形态与数目;对捕获细胞继续进行免疫化学反应研究膜蛋白表达。应用构建的芯片体系对不同种属相同组织、同一种属不同组织细胞膜糖链进行了检测,发现细胞膜糖链具有种属特异性和组织特异性;检测了16种细胞系和小鼠正常肝及肝癌组织细胞膜糖谱,发现肿瘤细胞膜唾液酸、乙酰葡萄糖、乙酰半乳糖、甘露糖和半乳糖糖链有所增加。该凝集素芯片有良好的特异性和稳定性,为研究细胞膜表面聚糖在细胞发育和癌变等过程中的变化提供了一个新的技术平台.
