食品级表达系统具有重要的应用价值。以公认安全的Bacillus subtilis DB104为对象，以食品级质粒pTA1060为载体，分别尝试利用其D-丙氨酸营养缺陷型的互补基因和源自乳酸链球菌的乳酸链球菌素抗性基因为选择标记，构建枯草芽孢杆菌的食品级表达系统；研究利用Sec途径信号肽和Tat途径信号肽及有理设计的人工信号肽为蛋白质输出信号来构建食品级耐热乳糖酶的分泌表达质粒；研究食品级重组菌与出发菌生理特性差异，对比基于两种选择标记的食品级表达系统的遗传稳定性，研究耐热乳糖酶的分泌表达，并对信号肽的分泌表达进行优化。.项目预期成果是构建一个新的基于枯草芽孢杆菌的食品级表达系统，实现耐热乳糖酶的高效分泌表达，为食品级重组微生物在食品饲料中的应用提供理论基础，具有较大的潜在应用价值；研究利用分泌信号肽实现耐热乳糖酶在芽孢杆菌中的分泌表达，为特定蛋白质实现分泌和分泌优化提供一个新的研究方法。

食品级表达系统具有重要的研究和应用价值。本项目以公认安全的枯草芽孢杆菌为研究对象，以食品级质粒为载体，分别利用枯草芽孢杆菌D-丙氨酸营养缺陷型的互补基因和乳酸链球菌素抗性基因为食品级选择标记，构建了多种整合型和附加载体型枯草芽孢杆菌食品级表达系统，实现了食品级耐热β-半乳糖苷酶在其中的表达；所构建的食品级重组菌与出发菌的生长性能接近，所有食品级表达系统的遗传稳定性良好。研究中构建了枯草芽孢杆菌分泌信号肽库及多种食品级分泌表达载体，以此探讨了枯草芽孢杆菌一般分泌途径信号肽和双精氨酸分泌途径信号肽对食品级耐热β-半乳糖苷酶的分泌表达效率，并通过双精氨酸途径实现了该目标酶的高效细胞外分泌。此外还实现该信号肽库分泌表达载体对其它目标蛋白质的分泌表达。 本研究为食品级重组微生物在食品加工领域的应用提供了理论和实践基础，具有较大的潜在应用价值。本项目研究成果为食品微生物学和微生物蛋白质分泌的理论研究和实际应用提供了新的研究思路和方法。