中文摘要
脊髓源神经干细胞应用于脊髓损伤较脑源性神经干细胞更利于损伤处功能的恢复,为得到更多脊髓源神经干细胞在神经发生和向运动神经元分化过程中的分子机制,有必要直接比较脊髓源神经干细胞与运动神经元在蛋白组学上的差异。本课题拟通过寻找出脊髓源神经干细胞与运动神经元的差异蛋白组,来解释造成差异的原因并指导神经干细胞的分化。方法:通过体外培养技术获取脊髓源神经干细胞,用台面洗淘法分离脊髓前角运动神经元,分别进行蛋白质提取、定量,然后在同等条件下进行2-D电泳,采用银染标记和考马斯亮兰染色标记显示2-D胶蛋白斑点,利用高分辨率的凝胶图像分析系统成像,通过分析软件比较二者电泳结果,寻找出差异点,用质谱仪对差异点处的蛋白进行分析并通过网络数据库确定差异蛋白或发现新蛋白,通过分析差异蛋白的功能,解释造成这种差异的原因,并提出指导神经干细胞分化的方案。
结题摘要
脊髓源神经干细胞应用于脊髓损伤较脑源性神经干细胞更利于损伤处功能的恢复,为探讨更多脊髓源神经干细胞在神经发生和向运动神经元分化过程中的分子机制,有必要直接比较脊髓源神经干细胞与运动神经元在蛋白组学上的差异。在本研究中,我们所获得的神经干细胞和运动神经元来自胚胎脊髓同一个体的组织,这样使得二者的比较更具有生物学统计意义;通过2D-DIGE与HPLC-ESI-MS/MS联合应用,我们寻找出了脊髓源神经干细胞与运动神经元的差异蛋白组;并用Real-time PCR对部分差异蛋白进行了验证分析,所得结果显示Real-time PCR结果与差异蛋白组学研究结果一致;通过在pubmed和Gene Ontology数据库中的检索,我们获得这些差异表达蛋白所参与的生物过程,经过综合分析,我们了解了这些差异蛋白在各自高表达细胞中的功能,这些功能均与各自细胞的特性相适应,同时也从理论上解释了造成这种差异的原因。同时,我们选择了在神经干细胞和成熟神经元中表达水平不同的信号分子,Hes1和Mash1及其相关基因,进行了进一步的研究,结果显示,这些信号分子在神经干细胞向神经元分化过程中起着重要的调控作用。
