肝纤维化是多种病因所致的慢性肝病共有的病理过程，其中心环节为肝星状细胞的激活。转化生长因子β（TGF-β）及激活素（Activin）是主要的促肝纤维化细胞因子，对于肝星状细胞的激活有着重要作用。他们通过SMAD信号通路实现细胞内信号转导，其中SMAD3是TGF-β和Activin在 SMAD信号通路中共同的关键信号蛋白。通过特异性阻断SMAD3 蛋白表达，可同时解除TGF-β和 Activin促肝纤维化作用，从而有可能起到高效抗肝纤维化作用。本研究拟在前期小干扰RNA (siRNA )靶位点选择及构建经验基础上，利用慢病毒表达系统，构建SMAD3为靶基因的可内源性高效表达siRNA的短发卡状RNA（shRNA），利用体外肝星状细胞培养和四氯化碳大鼠肝纤维化模型，探讨shRNA对TGF-β/ Activin信号的阻断作用和对肝纤维化的影响，从而为肝纤维化的治疗提供新的治疗思路。

转化生长因子β（TGF-β）及激活素对肝星状细胞激活有重要作用，SMAD3是两者信号通路中共同关键蛋白。阻断SMAD3 蛋白表达可能起到高效抗肝纤维化。本研究项目做了以下工作：①在体外，显示TGF-β1对大鼠肝星状细胞HSC-T6有促增殖、促肝纤维化相关胶原分泌等作用；HSC-T6保留了原代培养肝星状细胞部分特点，但并不完全相同。另一重要发现是大鼠肝细胞BRL-3A 对TGF-β1促凋亡和细胞周期阻滞作用并不敏感。②计算机软件设计了SMAD3多靶位siRNA,于BRL-3A细胞进行了有效靶位点筛选，构建了3条以慢病毒载体为表达系统，可内源性高效表达的短发卡状SMAD3 shRNA；③在体外，利用HSC-T6,发现shRNA慢病毒可有效阻断SMAD3 表达，有明显抗肝纤维化的作用。④SMAD3shRNA在四氯化碳大鼠肝纤维化模型体内有明显抗肝纤维化作用。⑤研究乙肝肝纤维化相关机制，发现磷酸鞘胺醇（S1P）及其受体（S1P receptor）促进肝星状细胞迁移，在人肝纤维化过程中有重要作用；MicroRNA-122 作用于HBx影响HBV复制