中文摘要
尿酸酶(EC 1.7.3.3)能够催化尿酸氧化生成尿囊素,从而降低人体内尿酸水平,特异性治疗高尿酸血症、痛风、肿瘤溶解综合症等症状。本项目在获得人、猪、牛尿酸酶基因的基础上,一方面采用DNA 家族改组(DNA family shuffling)技术,构建重组尿酸酶突变基因工程菌库,高效定向筛选新型人源化尿酸酶;另一方面通过人尿酸酶假基因外显子置换,构建重组猪尿酸酶杂合基因工程菌,分析外显子及突变位点对尿酸酶活性的影响。建立重组尿酸酶基因工程菌高效表达、产物分离纯化、免疫原性和体内药效学分析方法。本项目利用人尿酸酶假基因与功能基因重组的多样性,研究人尿酸酶假基因的进化失活可能基因片段、位点和轨迹;挖掘其功能,筛选具有自主知识产权的新型高效、低免疫原性的尿酸酶。这无疑为假基因资源的利用在研究策略和方法上进行有益的探索,因此,具有重要的理论意义和潜在的应用价值。
结题摘要
尿酸氧化酶又称尿酸酶( Urate oxidase;Uricase,EC 1.7.3.3,UOX) ,是生物体内嘌呤降解代谢途径中的关键酶,它催化尿酸分解生成尿囊素,促进体内尿酸排泄,降低尿酸水平,特异性地治疗高尿酸血症、痛风、肿瘤溶解综合征等。本项目在获得猪、牛、人尿酸酶基因的基础上,采用DNA家族改组(DNA family shuffling)技术,成功地构建了重组枯草芽孢杆菌尿酸酶突变基因工程菌库突变基因工程菌库,筛选获得具有尿酸酶活性变体208个。为揭示人尿酸酶假基因的进化轨迹、进一步筛选具有潜在应用价值的尿酸酶奠定了基础。
