中文摘要
将热激活启动子(hsp)控制的家蚕杆状病毒的蜕皮甾醇尿苷二磷酸葡萄糖基转移酶基因(egt)克隆进具有绿色荧光蛋白基因(GFP)和新霉素基因(neo)的双重标记的转座子载体(piggyGFP-neo),进行家蚕转基因,通过GFP和neo的双重筛选并结合PCR、Southern杂交鉴定,获得转egt基因家蚕,蛹期热激活诱导egt表达,探讨egt表达与蛹血淋巴蜕皮激素(MH)水平、蛹期经过、永久蛹产生的关系;将hsp启动子控制的蝎毒素基因(BmK IT3)克隆进piggyGFP-neo转座子载体,并进行家蚕转基因,通过筛选获转BmK IT3基因家蚕,蛹期诱导BmK IT3基因表达,研究BmK IT3表达与神经麻痹蛹产生、麻痹蛹的可保护期限的关系。蚕变态与发育的人为调控是蚕业科学的根本性问题之一,本研究旨在通过转基因,获得蛹期显著延长或蛹发育中止的转基因家蚕,改革蚕茧收烘、缫丝模式,提高蚕丝质量。
结题摘要
为了通过转基因对蚕蛹发育进行控制,实现鲜茧缫丝,构建了基于piggyBac转座子的转基因载体,该转载体具有hsp启动子控制BmKIT3或egt基因表达盒和ie-1启动子控制neo基因表达盒;用精子介导法将载体导入蚕卵,通过GFP和G418抗性双重筛选,结合PCR、点杂交等分子生物学鉴定获得了转基因家蚕。结果显示:带有hsp20.4-BmKIT3表达盒的转基因家蚕产卵数减少,卵孵化率降低,在G3代不同转基因系统中,平均孵化率为62.5%,存活率约为46.84%,15.94%存活的蛹在化蛾前死亡,死亡蛹干瘪不腐烂。在G4代,约99%蚕在3龄前死亡,western blot可检测到BmKIT3在转基因家蚕中的表达;带有hsp23.7-egt表达盒的转基因家蚕在G1代,蚕卵的孵化率为32% - 52%,幼虫阶段蚕发育相差1-2个龄期,部分蚕因不能蜕皮而死亡。有近25%的蚕蛹发育中止,蚕蛹发育推迟2-4天,未化蛾蛹干瘪不腐烂。表明hsp启动子具有组成型表达特征,蛹期特异性表达BmKIT3或EGT可以中止蚕蛹的发育。另外,还构建了GAL4/UAS双系统,发现BBX-B8过量表达导致蜕皮次数增加。
