中文摘要
本项目以遗传性痉挛性截瘫致病基因HSP-SPG6/NIPA1为研究对象,采用双膜酵母菌双杂交系统从人类cDNA库中搜寻能与Nipa1相互作用的蛋白。通过载体上的引物进行DNA测序,将生物信息学与遗传学相结合充分利用国际上共享的生物资源把测得的DNA序列放到人类基因组或NCBI、Swiss-Prot 、Pfam、EMBL等信息库中进行计算机分析查找筛选出的蛋白功能。通过对这些蛋白功能研究去发掘Nip
结题摘要
本项目以遗传性痉挛性截瘫致病基因HSP-SPG6/NIPA1为研究对象,采用双膜酵母菌双杂交系统从人类cDNA库中搜寻能与Nipa1相互作用的蛋白功能,从而探讨Nipa1的基因功能。 实验从2007年元月开始至2007年12月结束。首先按实验流程图顺利的将Nipa1全长cDNA从PET44(a)载体中酶切后克隆到诱饵载体中,后续步骤基本按DUALmembrane 3 kit进行。 从人脑cDNA文库中筛选出40个候选蛋白,在检测出的40个阳性克隆中,大部分与离子通道基因等有关,但候选蛋白种类过多不足以筛查出特异性较强的蛋白。由于时间和经费由原来的3年压缩为1年,故后面的第二次增强特异性的筛选没能进行。结果和我们预期基本是相符合的。它为后续研究工作提供了一定的研究基础,为找出有效的治疗方法提供科学的理论依据。通过我们对双膜双杂交系统的应用发现这种方法确实有效可行,但缺乏一定的特异性,必须联合其他方法来增强特异性,否则很难将候选蛋白范围缩小。
