中文摘要
在流产胎儿骨骺LaCroix环中提取前软骨干细胞，建立模拟EXT1exon-6cDNA第2120位T缺失突变的永生化前软骨干细胞株, 通过量子点成像技术,观察和比较突变前软骨干细胞和正常前软骨干细胞的Ihh（前肥大型软骨细胞的标志）、X型胶原（肥大型软骨细胞的标志）等分化指标在细胞分化过程中的变化；通过多模式分子成像荧光示踪技术，观察和比较突变前软骨干细胞和正常前软骨干细胞在NOD/SCID小鼠体
结题摘要
目的：体外分离、培养、鉴定人前软骨干细胞（PSC），建立猿肾病毒40大T抗原基因（SV40Tag）永生化前软骨干细胞系，为构建模拟EXT1exon-6cDNA第2120位T缺失突变的永生化前软骨干细胞株及研究其与前软骨干细胞分化之间的关系提供稳定的细胞来源。方法：用免疫磁性分选技术分离PSC，用流式细胞术、免疫组化、免疫荧光、RT-PCR方法鉴定纯化后的PSC。利用脂质体介导的基因转染技术将含有SV40Tag的质粒pCMVSV40T/PUR转染PSC,转染细胞经嘌呤霉素筛选后的阳性克隆传代扩大培养，用免疫组化、RT-PCR、Southern印迹杂交的方法检测SV40Tag在永生化前软骨干细胞（IPSC）中的表达。结果：用免疫磁性分选技术能分离、培养出高纯度的PSC，成纤维细胞生长因子受体-3 (FGFR-3)阳性表达；转染后筛选获得的阳性细胞克隆，能连续传代培养，SV40Tag在转染细胞中阳性表达。结论：成功分离、培养出高纯度的PSC，成功构建了SV40Tag永生化的人前软骨干细胞株。