中文摘要
以大白菜核基因雄性不育"两用系"的可育株(MsfMs)和不育株(MsMs)花蕾为材料,从细胞学水平研究大白菜雄性不育的花药发育过程,明确花药败育时期;以不同发育时期的可育和不育花蕾为材料,分别进行正反抑制消减杂交,构建正反抑制消减cDNA文库;挑取文库克隆进行差异筛选,剔除假阳性克隆,筛选出不育与可育材料在不同发育时期的差异表达基因;对所得的差异片段进行测序、同源性分析及生物信息学功能分析,利用Northern blot和RT-PCR对新基因表达情况进行验证。根据雄性不育与可育株不同发育时期的差异表达基因及功能分析结果,探索大白菜核雄性不育的基因调控机制。有关基因片段的获得,可为进一步克隆雄性不育复等位基因,探明大白菜核雄性不育分子机制奠定基础。
结题摘要
以大白菜核雄性不育“两用系AB01”的可育株(MsfMs)和不育株(MsMs)花蕾为材料,从细胞学水平研究大白菜雄性不育的花药发育过程,明确花药败育时期;利用抑制差减杂交技术及找到27个差异表达基因,其中25个基因在NCBI数据库中均有同源序列,随机挑取5个基因进行RT-PCR验证,BLAST功能比对结果推测复等位基因遗传的核雄性不育大白菜不育的发生与脂类、能量代谢及光合作用有关,分离和克隆了3个育性相关基因BMFHCT、BFAPG和BFSKS,获得了它们的全长序列,通过BLASTX比对推测它们分别为肉桂酸转移酶基因、脯氨酸富集基因和多铜氧化酶基因。通过荧光定量PCR进行了时序表达研究。,表明这三个基因均为雄蕊发育相关基因;采用cDNA-AFLP技术找到16个差异表达的基因。其中11个在可育材料中上调表达,5个在不育材料中上调表达。BLAST功能分析结果表明,这些基因主要可分为花/蕾发育相关基因、代谢相关基因和细胞结构相关基因。随机选取4个基因片段都得到了RT-PCR的验证。这些研究为进一步克隆雄性不育相关基因,探明复等位基因遗传的大白菜核雄性不育分子机制奠定了基础。
