由二氢青蒿酸生物合成青蒿素仅是自动氧化反应，还是酶促反应，抑或二者兼而有之，至今尚无确切结论。根据前期实验结果，我们初步推论此途径应包括酶促反应和自动氧化反应，且以前者为主。本项目拟利用黄花蒿悬浮培养细胞及其酶系统，探索二氢青蒿酸生物合成青蒿素的酶催化反应与代谢调控。首先，以二氢青蒿酸为底物，利用黄花蒿悬浮培养细胞生物合成青蒿素，运用色谱和光谱技术分离和鉴定各中间体；其次，利用从黄花蒿悬浮培养细胞中获取的酶系对二氢青蒿酸及各相关中间体进行酶催化反应，进而确定从二氢青蒿酸到青蒿素的生物合成途径，并区分自动氧化产物及酶催化产物；最后，在酶活测试指导下，分离纯化二氢青蒿酸生物合成青蒿素过程中的关键酶，并运用谱学和蛋白质测序技术研究其氨基酸序列。本研究将首次从分子水平上为青蒿素生物合成途径提供科学证据，填补国内外该领域研究空白。研究结果对于确认二氢青蒿酸生物合成青蒿素的酶催化反应途径具有重要意义。