中文摘要
花狭口蛙海南亚种(Kaloula pulchra hainana),为海南省特有两栖动物,隶属无尾目(AUNRA),姬蛙科(Microhylidae),狭口蛙属(Kaloula),生活于海南省低海拔地区水沟附近,其生存环境恶劣,富有大量病原体。两栖动物皮肤湿润、裸露,表面布满粘液腺、微血管、甚至毒腺,因而其皮肤中含有大量分子结构特殊、功能复杂多样的生物活性物质,并已部分应用于临床,用于止痛及治疗从烧伤到心脏病等多种疾病。本项目结合生物化学、分子生物学、药理学等知识和手段,深入研究花狭口蛙海南亚种皮肤活性蛋白多肽的生物活性,结构和功能的关系,揭示两栖类皮肤活性蛋白多肽的生理、毒理和药理活性,及其分子间相互作用的生物逻辑,分子机制等,从而解释两栖类皮肤活性蛋白多肽的生物学功能和生物环境适应机制,并为其应用于药物研究与开发打下基础。
结题摘要
花狭口蛙海南亚种,为海南省特有两栖动物,隶属无尾目,姬蛙科,狭口蛙属,生活于海南省低海拔地区水沟附近,生存环境恶劣富有大量病原体。受刺激时其皮肤分泌大量白色分泌物,对其进行多种生物学活性筛选。目前从其皮肤分泌物中得到胰蛋白酶抑制剂KPHTI,为单链糖蛋白,分子量23kDa,N末端氨基酸序列为DHEVTS,与已知胰蛋白酶无序列相似性。选择性作用于胰蛋白酶,对糜蛋白酶、凝血酶、弹性蛋白酶、枯草杆菌蛋白酶无制制,为竞争性抑制剂,Ki=27nM,对DTT敏感,对温度及pH不敏感。分别从皮肤匀浆物和血浆中获得皮肤白蛋白和血清白蛋白,皮肤白蛋白带有heme b辅基(0.5mol heme b/mol蛋白),而血清白蛋白则无。经反转录获得部分血清白蛋白cDNA序列。从皮肤分泌物中获得具有较强溶血活性的组分Kph-hemolysin,分子量47kDa,单链蛋白。研究发现,该组分通过在红细胞膜上打孔溶解红细胞,而不引起细胞膜氧化性损伤,可能为孔道蛋白。对该组分的研究由国家自然科学基金资助正进行深入研究。目前发表SCI收录论文一篇,核心期刊论文三篇。
