中文摘要
免疫调节作用是中药多糖的共性,但因多糖分离纯化和结构分析困难,使其构效关系及分子机理特别是作用受体研究受到限制。本研究集体在两个国家自然科学基金面上项目的资助下,成功分离得到组分均一、结构明确的枸杞糖链LbGp4-OL并确证B淋巴细胞是其免疫作用的靶细胞,在B细胞膜上存在它的结合位点。本项目拟在此基础上,运用化学和酶学方法将LbGp4-OL及其主链降解为不同分子量和不同结构的片段,经免疫活性评价确定其中主要活性片段,分析其结构,阐释LbGp4-OL化学结构中的"活性中心"即免疫活性决定簇;同时制备小鼠B细胞膜蛋白和3H标记的LbGp4-OL,运用双向凝胶电泳和放射自显影寻找LbGp4-OL在B细胞膜上的特异结合蛋白,通过质谱分析确定该蛋白的种类和性质,为下一步研究LbGp4-OL在B细胞膜上的受体蛋白奠定基础。本项目对阐明枸杞多糖构效关系、免疫作用分子机理及糖类药物研究与开发具有重要意义。
结题摘要
免疫调节作用是中药多糖的共性,但因多糖分离纯化和结构分析困难,使其构效关系及作用受体研究受到极大的限制。本项目在化学研究方面,成功分离得到组份均一、结构明确的枸杞糖链LbGp4-OL,累积了足量的糖链LbGp4-OL样品;经过大量的文献调研和标记方法的比较,建立了对LbGP4-OL进行位点选择性FITC荧光标记的方法,并获得了与未标记的LbGp4-OL活性一致的FITC-LbGp4-OL。药理学研究方面,我们确证了B淋巴细胞是其免疫作用的靶细胞,在B细胞膜上存在其结合位点,并进一步发现LbGP4-OL作用的B淋巴细胞主要为活化的B淋巴细胞,对静息的B淋巴细胞无明显影响。同时,用CD19等抗体封闭FITC-LbGp4-OL与B细胞的结合,初步确定CD19分子可能是LbGp4-OL作用的靶分子之一。后续的工作中,将裂解糖链LbGp4-OL,获得不同长度的多糖片段,探讨该多糖是否存在"活性中心",并采用CD19Cre突变小鼠B淋巴细胞进一步确定CD19分子是否为其作用的靶分子。本研究表明,多糖作用的靶分子并不局限于Tool样受体一类的模式识别受体,这将为多糖作用靶分子的研究提供一条新思路。
