毒邪致病论是中医对动脉粥样硬化（AS）病机认识，与AS发病机制的炎症学说相吻合，但鲜有科学依据印证；高脂、高糖、感染等各种致病因素下，炎性损伤的血管内皮细胞（VEC）与平滑肌细胞（SMC）相互作用引起信号分子及其转导通路的改变、诱导SMC增殖是AS发生发展关键，也一直缺乏系统的研究。本项目以已结题国家自然基金研究为基础，以AS致病的毒邪本质正是引发炎症反应因素为切入点，建立家兔AS模型和VEC-SMC体外共培养体系，探讨AS病理状态下，清热解毒中药丹皮酚（Pae）对氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）、高糖（GS）、细菌脂多糖（LPS）刺激VEC-SMC共培养体系表达信号分子的调控特点，以及Pae调节VEC趋化、粘附功能和SMC迁移、增殖功能的分子机制；从细胞信号转导水平明确AS毒邪致病的关键信号分子及其信号通路；揭示"AS从毒论治"的科学内涵；亦为筛选清热解毒中药抗AS的作用靶点提供新思路。

目的：探讨在高脂（ox-LDL）、高糖（GS）、感染（LPS）等因素刺激下，血管内皮细胞（VEC）与平滑肌细胞（SMC）相互作用引起信号分子及其转导通路的改变并诱导SMC增殖的分子机制。方法：Transwell小室建立SMC和VEC共培养体系, ox-LDL、GS、LPS与大鼠VEC共孵育复制损伤模型；MTT法测定VEC存活率；孟加拉玫瑰红活细胞染色法测定MC与VEC的黏附值；流式细胞仪检测游离[Ca2+]及SMC增殖与凋亡率；ELISA试剂盒检测ET-1、IL-1β、TNF-α、IP3、DAG水平；免疫组化检测PDGF-B、PCNA、VEGF、ICAM-1表达；Western blotting检测 VEGF、PI3K、AKT、P-AKT、IκB、p-IκB、p-P65、Ras、Raf、P-Raf、ERK1/2、P-ERK1/2、p-PKC等蛋白表达。结果：1. Pae（30，60，120μM)对ox-LDL(50 mg？L-1)损伤的VEC粘附功能及其所诱导的SMC增殖和迁移有抑制作用。Pae抑制SMC表达PCNA；下调VEC分泌PDGF、VEGF、TNF-α、ET-1；抑制PI3K、AKT的磷酸化水平及IP3、DAG、游离[Ca2+]及PKC、PLC活性，从而调控SMC的增殖功能。2. Pae（30，60，120 μM)提高高糖(35.5 mM)损伤的VEC存活率并降低VEC膜通透性。Pae通过降低VEC分泌VEGF、PDGF；抑制Ras、ERK等激酶的活化，抑制VSMC信号通路Ras-Raf-ERK1/2的激活，达到抑制VSMC增殖作用。3. Pae（30，60，120μM)对LPS(100 ng？ml-1) 致VEC损伤有保护作用；Pae抑制VEC分泌IL-1β、TNF-α并抑制p38MAPK通路和PI3K/AKT/NF-κB通路相关蛋白表达而实现对VSMC增殖的抑制作用。结论：Pae有效保护由ox-LDL、GS、LPS损伤的VEC；降低VEC与单核细胞粘附；对由内皮损伤诱导的SMC增殖、迁移和PCNA蛋白表达有明显的抑制作用。可能机制是：抑制VEC合成和释放促炎因子和生长因子；从不同位点阻断PI3K-AKT-NF-κB信号通路的活化、Ras-Raf-ERK1/2信号通路的转导及IP3/DG通路对下游信号分子的调控。